[发明专利]一种早期检测肝癌发生或转移的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b联合检测试剂盒

权利要求书

1.一种早期检测肝癌发生或转移的分子标记物，其特征在于，该分子标记物为hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b。

2.hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b在制备检测肝癌发生或转移的检测试剂或试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b在制备检测肝癌发生或转移的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂为检测生物样品中hsa-mir-135a含量、hsa-mir-302d含量，和hsa-mir-10b含量的试剂的组合。

4.根据权利要求2所述的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b在制备检测肝癌发生或转移的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的试剂盒包含了检测生物样品中hsa-mir-135a含量的试剂、hsa-mir-302d含量的试剂，和hsa-mir-10b含量的试剂。

5.根据权利要求3或4所述的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b在制备检测肝癌发生或转移的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测生物样品中hsa-mir-135a含量的试剂、hsa-mir-302d含量的试剂，和hsa-mir-10b含量的试剂，选自：对hsa-mir-135a、hsa-mir-302d或hsa-mir-10b具有检测特异性的PCR引物。

6.根据权利要求3或4所述的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b在制备检测肝癌发生或转移的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的生物样品选自：获自对象的新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组织或细胞、血液或体液。

7.一种早期检测肝癌发生或转移的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b联合检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含了检测血浆或血清中hsa-mir-135a含量的试剂、hsa-mir-302d含量的试剂，和hsa-mir-10b含量的试剂。

8.根据权利要求7所述的一种早期检测肝癌发生或转移的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b联合检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒是由反转录系统、引物系统和扩增系统组成，所述的引物系统包括：

通用的反转录引物序列如SEQ ID NO:4所示；

通用实时定量PCR引物如SEQ ID NO:5所示；

hsa-mir-135a特异实时定量PCR引物如SEQ ID NO:6所示；

hsa-mir-302d特异实时定量PCR引物如SEQ ID NO:7所示；

hsa-mir-10b特异实时定量PCR引物如SEQ ID NO:8所示。

9.根据权利要求8所述的一种早期检测肝癌发生或转移的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b联合检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒，包含如下试剂：

A)通用的反转录引物序列(SEQ ID NO:4)，1管,浓度:10μM，100μl/管；

B)通用实时定量PCR引物(SEQ ID NO:5)，1管,浓度:10μM，100μl/管；

hsa-mir-135a特异实时定量PCR引物(SEQ ID NO:6)，1管,浓度:10μM，100μl/管；

hsa-mir-302d特异实时定量PCR引物(SEQ ID NO:7)，1管,浓度:10μM，100μl/管；

hsa-mir-10b特异实时定量PCR引物(SEQ ID NO:8)，1管,浓度:10μM，100μl/管；

C)总RNA提取试剂Trizol reagent,1管，2ml/管；

D)氯仿，1管，500μl/管；

E)异丙醇，1管，1.500ml/管；

F)无水乙醇，1管，7ml/管；

G)DEPC H₂O，1管，1ml/管；

H)dd H₂O，1管，2ml/管。

10.一种利用如权利要求7至9任一所述的早期检测肝癌发生或转移的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b联合检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述的检测方法为：按常规抽血取血清或血浆，用总RNA提取试剂处理血清或血浆，加氯仿离心后取上层水相，经异丙醇沉淀及酒精沉淀富集血清或血浆中的小RNA；由反转录系统反转录小RNA成cDNA；用扩增系统进行Real-time PCR扩增，测定hsa-mir-135a、hsa-mir-302d和hsa-mir-10b的含量。