[发明专利]一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变的检测方法，所述的方法为非诊断和治疗目的的方法，其特征在于，包括如下进行的步骤：

(1)取待检测的样本，提取全基因组DNA；

(2)采用PCR引物对Ⅰ、PCR引物对Ⅱ、PCR引物对Ⅲ和PCR引物对Ⅳ对所述步骤(1)中得到的全基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述PCR引物对Ⅰ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述PCR引物对Ⅱ的上游引物和下游引物序列如SEQID NO：3和SEQ ID NO：4所示，所述PCR引物对Ⅲ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，所述PCR引物对Ⅳ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：7和SEQID NO：8所示；所述PCR扩增在两个PCR反应体系中进行，所述PCR引物对Ⅰ和PCR引物对Ⅲ在PCR反应体系Ⅰ中对全基因组DNA进行PCR扩增，所述PCR引物对Ⅱ和PCR引物对Ⅳ在PCR反应体系Ⅱ中对全基因组DNA进行PCR扩增；还包括采用内参引物PCR引物对Ⅴ对所述步骤(1)中得到的全基因组DNA进行PCR扩增；所述PCR引物对Ⅴ在PCR反应体系Ⅱ中对全基因组DNA进行PCR扩增；所述PCR引物对Ⅴ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；

(3)对所述步骤(2)中得到的PCR扩增产物进行分析，判断待检测的样本全基因组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的四个位点是否存在突变；所述PCR反应体系Ⅰ和PCR反应体系Ⅱ中还包括荧光探针；所述反应体系Ⅰ中包括荧光探针Ⅰ和/或荧光探针Ⅰ’，荧光探针Ⅲ；所述反应体系Ⅱ中包括荧光探针Ⅱ，荧光探针Ⅳ和内参荧光探针Ⅴ；所述荧光探针Ⅰ序列如SEQ ID NO：11所示，所述荧光探针Ⅰ’序列如SEQ ID NO：12所示，所述荧光探针Ⅱ序列如SEQID NO：13所示，所述荧光探针Ⅲ序列如SEQ ID NO：14所示，所述荧光探针Ⅳ序列如SEQ IDNO：15所示，所述内参荧光探针Ⅴ序列如SEQ ID NO：16所示。

2.一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测的试剂盒，其特征在于，包括PCR引物对Ⅰ、PCR引物对Ⅱ、PCR引物对Ⅲ和PCR引物对Ⅳ；所述PCR引物对Ⅰ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述PCR引物对Ⅱ的上游引物和下游引物序列如SEQ IDNO：3和SEQ ID NO：4所示，所述PCR引物对Ⅲ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，所述PCR引物对Ⅳ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：7和SEQ IDNO：8所示；所述试剂盒还包括荧光探针Ⅰ和/或荧光探针Ⅰ’，荧光探针Ⅱ，荧光探针Ⅲ和荧光探针Ⅳ；所述荧光探针Ⅰ序列如SEQ ID NO：11所示，所述荧光探针Ⅰ’序列如SEQ ID NO：12所示，所述荧光探针Ⅱ序列如SEQ ID NO：13所示，所述荧光探针Ⅲ序列如SEQ ID NO：14所示，所述荧光探针Ⅳ序列如SEQ ID NO：15所示。

3.根据权利要求2所述的一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测的试剂盒，其特征在于，还包括内参引物PCR引物对Ⅴ，所述PCR引物对Ⅴ的上游引物和下游引物序列如SEQ IDNO：9和SEQ ID NO：10所示。

4.根据权利要求2所述的一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测的试剂盒，其特征在于，还包括内参荧光探针Ⅴ，所述内参荧光探针Ⅴ序列如SEQ ID NO：16所示。