[发明专利]草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

说明书

本发明提供一种草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法以及通过该方法获得的草木犀药材的标准指纹图谱。根据本发明的草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法包括制备供试样品溶液的步骤和超高效液相色谱分析步骤。根据本发明的方法简单、色谱分析条件容易实现、精密度高，而且分析结果的稳定性和重现性较好，与现有技术的其它测试分析方法相比，缩短了在线分析时间，节省了材料成本和时间成本。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及草木犀药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。

背景技术

草木犀又写作草木樨，为豆科草木犀属(Melilotus Miller)，一年生或二年生草本植物。草木犀常见生于沙丘、山坡、草原、海边，分布于我国大部分省区，又名辟汉草、省头草、野苜蓿及铁扫把。目前在我国栽培的多为白花草木犀和黄花草木犀。黄花草木犀由于其自身的生长优势和化学成分适宜，在中国被用作很好的香料原料。草木犀可以以全草入药，民间以叶、花制成软膏，用作外用药，或煎服用于治疗浮肿、腹痛、疟疾等症。

由于草木犀的生长地域差异，所以作为中药材使用的草木犀存在质量控制不稳定、并且难以进行定性和定量分析等问题。中药指纹图谱是指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体的特征图谱，目前已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效手段之一。目前最新的指纹图谱测试方法之一是超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)，这是最近几年出现的一种新型液相色谱技术，采用1.7μm的小粒径色谱柱填料，不仅使柱效得以提高，而且在较宽的流速范围内柱效保持恒定，从而有利于通过提高流动相的流速而缩短分析时间，提高分析通量。相对于常规HPLC(高效液相色谱，High Performance Liquid Chromatography)而言，UPLC有更好的分离效率、峰容量以及灵敏度。但是，在草木犀药材分析技术领域，还仍未有用UPLC对草木犀药材进行质量控制分析以及报道其指纹图谱。

因此，本发明提供一种首次利用UPLC技术，对草木犀药材指纹图谱进行研究，为草木犀药材质量控制提供了新的技术方法。

发明内容

本发明提供一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的草木犀药材标准指纹图谱及其在草木犀药材优化筛选、品质的鉴别和控制中的应用。根据本发明的构建方法解决了草木犀药材的成分分析中不能有效地反映和控制草木犀药材的整体质量的问题，弥补了现有质量控制技术的不足。

根据本发明的一个方面，提供一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括：

(1)制备草木犀药材的多个供试样品溶液及香豆素对照样品溶液；

(2)将步骤(1)所制备的供试样品溶液及对照样品溶液分别进行超高效液相色谱分析，得到超高效液相色谱图；

(3)以对照样品溶液的超高效液相色谱图作为对照，从步骤(2)所得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建草木犀的标准指纹图谱，

所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：

采用反相填料色谱柱，用流动相乙腈-0.05～0.2体积％磷酸或醋酸水溶液进行梯度洗脱，紫外检测波长为220～277nm。

在本发明的一个优选实施方式中，所述步骤(1)制备草木犀药材的供试样品溶液及香豆素对照样品溶液的方法包括用30～70体积％的甲醇水溶液处理；优选地，所述甲醇水溶液为50体积％的甲醇水溶液。

在本发明的另一优选实施方式中，本发明中所使用的反相填料色谱柱为WatersAcquity UPLC^TM BEH C18，该色谱柱尺寸为50mm×2.1mm，填料颗粒度为1.7μm。