[发明专利]草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括：

(1)制备草木犀药材的多个供试样品溶液及香豆素对照样品溶液；

(2)将步骤(1)所制备的供试样品溶液及对照样品溶液分别进行超高效液相色谱分析，得到超高效液相色谱图；以及

(3)以对照样品溶液的超高效液相色谱图作为对照，从步骤(2)所得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建草木犀的标准指纹图谱，

所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：

采用反相填料色谱柱，用流动相乙腈-0.05～0.2体积％磷酸或醋酸水溶液进行梯度洗脱，紫外检测波长为220～277nm；

所述梯度洗脱的程序为：0min→1.5min→3.5～4.0min→5.0min，乙腈5～10体积％→13～22体积％→13～22体积％→5～10体积％；

所述流动相的流速为0.6～0.7mL/min。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中制备草木犀药材的供试样品溶液及香豆素对照样品溶液的方法包括用30～70体积％的甲醇水溶液处理。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述反相填料色谱柱为WatersAcquity UPLC^TM BEH C18，其中色谱柱尺寸为50mm×2.1mm，填料颗粒度为1.7μm。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0min→1.5min→3.5～4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13～15体积％→13～15体积％→5体积％。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0min→1.5min→4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13体积％→13体积％→5体积％。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件还包括：柱温在25～40℃范围内。

7.根据权利要求1～3和6中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：所述流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液，流速为0.6mL/min，波长为277nm，柱温为30℃。

8.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：所述流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液，流速为0.6mL/min，波长为277nm，柱温为30℃。

9.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：所述流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液，流速为0.6mL/min，波长为277nm，柱温为30℃。

10.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从步骤(2)在紫外检测波长277nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包含14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.102(±5％)、峰4：0.345(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.669(±5％)、峰7：0.686(±5％)、峰8：0.713(±5％)、峰9：0.801(±5％)、峰10：0.866(±5％)、峰11：0.912(±5％)、峰12：1.000(±5％)、峰13：1.036(±5％)和峰14：1.101(±5％)。

11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于，所述14个共有特征峰中，峰10为草木犀酸；峰12为香豆素；峰14为邻香豆酸。