[发明专利]用于检测猪组织中赭曲霉毒素A的预处理试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于食品化学检测领域，特别涉及一种用于检测猪组织中赭曲霉毒素A的预处理试剂盒及其应用。

背景技术

赭曲霉素A(Ochratoxin A，OTA)是曲霉属和青霉属菌产生的一类毒性化合物，常常污染食品和饲料。OTA在世界范围造成经济损失居毒枝菌素的第二位，仅次于黄曲霉毒素。赭曲霉毒素具有致畸、致癌、致突变、免疫学毒性等毒性，国际癌症研究机构(IARC)将赫曲霉毒素A定为2B类致癌物。赭曲霉毒素主要靶器官是肾脏，能引起肾脏疾病。动物试验表明，赭曲霉毒素A可导致实验动物肝肾损害，诱发肝肾肿瘤，造成肾肿大；也可造成肠炎、淋巴坏疽、肝肿大等疾病。

赫曲霉毒素A在谷物中自然产生，特别在大麦中广泛存在，一般易感染赫曲霉毒素A的食品包括：大豆、绿豆、咖啡豆、酒、葡萄汁、调味品、草本植物等。动物吃了含赫曲霉毒素A的饲料后会导致体内赫曲霉毒素A蓄积，因此在动物性食品中，尤其是猪的肾脏、肝脏、肌肉、血液等中常有赫曲霉毒素A被检出；人们通过食用被赭曲霉毒素A污染的食品，从而将赭曲霉毒素A引入人体，造成毒性伤害。随着对赭曲霉毒素A危害的深入研究，公众逐渐认识到对社会经济和人类健康造成严重的威胁，各国政府对药品食品中赭曲霉毒素A的分布及检测也给与了极大的关注，世界粮农组织和世界卫生组织食品添加剂专家委员会(The Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,JECFA)经过对是赭曲霉毒素A毒性的评价后，将是赭曲霉毒素A每周的最大耐受摄入量定为0.1ug·kg-1。美国、欧盟和我国对食品、饲料中的是赭曲霉毒素A制定了严格的限量标准。

我国在食品方面已相继出台了很多霉菌毒素的法定标准(参见GB2715-2005食品中真菌毒素限量[s]和GB2761-2011食品中真菌毒素限量[S]，但对赭曲霉毒素A在食品中的检查仅限于谷物及其制品、豆类及其制品，猪组织中赭曲霉毒素A无标准出台。

因此，急需开发猪组织中赭曲霉毒素A残留的高效测定方法。

发明内容

鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供一种用于猪组织的预处理试剂盒，以及利用该试剂盒连同色谱净化超高液相色谱-串联质谱测定猪组织中赭曲霉毒素A的方法。该试剂盒和方法可用于猪组织中赭曲霉毒素A残留的测定，为拟定食品中赭曲霉毒素A的标准提供技术服务。

本发明的技术方案如下：

一种用于检测猪组织中赭曲霉毒素A的预处理试剂盒，其特征在于：包括缓冲液、提取液1、提取液2、IAC柱、淋洗液和洗脱液；

所述缓冲液为1mol/L的磷酸溶液；

所述提取液1为乙酸乙酯；

所述提取液2为0.5mol/L、pH8.4的碳酸氢钠溶液；

所述淋洗液为150g氯化钠、2.5g碳酸氢钠溶于水中，加0.1ml吐温-20并用水定容至1L获得的溶液；

所述洗脱液为甲醇：乙酸(V:V)＝49:1的甲醇/乙酸混合液。

一种检测猪组织中赭曲霉素A的方法，包括如下步骤：

(1)获取标准曲线：

a.将赭曲霉毒素A标准品溶于体积比为99:1的冰醋酸：苯配制成1μg/mL的OTA标准品储备液；

b.将OTA标准品储备液用色谱流动相溶液稀释成不同浓度的系列OTA标准溶液；

c.将空白样品猪组织进行匀浆处理，并利用所述的试剂盒对空白样品猪组织匀浆进行预处理：

i.并准确称取2.0g空白样品猪组织匀浆，加入0.6ml缓冲液中，涡旋混匀后，用5ml提取液1提取3次，再用5ml提取液2提取2次；

ii.所得提取后的溶液再经缓冲液调节pH至6.8-8.0，然后将所得溶液通过IAC柱；

iii.用10ml淋洗液淋洗，3ml洗脱液洗脱；

iv.收集洗脱后的溶液，用氮气吹干获得空白样品产物；

d.将上述系列OTA标准溶液分别注入空白样品产物中，获得系列梯度浓度的标准曲线溶液；

e.取10μl上述系列梯度浓度的标准曲线溶液进行超高液相色谱-串联质谱仪检测，以标准曲线溶液中的OTA浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

(2)检测待测样品：

a.采集待测猪组织进行匀浆处理；

b.利用权利要求1所述的试剂盒按照第(1)步中c部分i～iv所述的步骤对待测猪组织匀浆进行预处理，将氮气吹干后的待测样品产物溶于1ml色谱流动相溶液获得供试品溶液；