[发明专利]用于检测猪组织中赭曲霉毒素A的预处理试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测猪组织中赭曲霉毒素A的预处理试剂盒，其特征在于：包括缓冲液、提取液1、提取液2、IAC柱、淋洗液和洗脱液；

所述缓冲液为1mol/L的磷酸溶液；

所述提取液1为乙酸乙酯；

所述提取液2为0.5mol/L、pH8.4的碳酸氢钠溶液；

所述淋洗液为150g氯化钠、2.5g碳酸氢钠溶于水中，加0.1ml吐温-20并用水定容至1L获得的溶液；

所述洗脱液为甲醇：乙酸(V:V)＝49:1的甲醇/乙酸混合液。

2.一种检测猪组织中赭曲霉素A的方法，包括如下步骤：

(1)获取标准曲线：

a.将赭曲霉毒素A标准品溶于体积比为99:1的冰醋酸：苯配制成1μg/mL的OTA标准品储备液；

b.将OTA标准品储备液用色谱流动相溶液稀释成不同浓度的系列OTA标准溶液；

c.将空白样品猪组织进行匀浆处理，并利用权利要求1所述的试剂盒对空白样品猪组织匀浆进行预处理：

i.并准确称取2.0g空白样品猪组织匀浆，加入0.6ml缓冲液中，涡旋混匀后，用5ml提取液1提取3次，再用5ml提取液2提取2次；

ii.所得提取后的溶液再经缓冲液调节pH至6.8-8.0，然后将所得溶液通过IAC柱；

iii.用10ml淋洗液淋洗，3ml洗脱液洗脱；

iv.收集洗脱后的溶液，用氮气吹干获得空白样品产物；

d.将上述系列OTA标准溶液分别注入空白样品产物中，获得系列梯度浓度的标准曲线溶液；

e.取10μl上述系列梯度浓度的标准曲线溶液进行超高液相色谱-串联质谱仪检测，以标准曲线溶液中的OTA浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

(2)检测待测样品：

a.采集待测猪组织进行匀浆处理；

b.利用权利要求1所述的试剂盒按照第(1)步中c部分i～iv所述的步骤对待测猪组织匀浆进行预处理，将氮气吹干后的待测样品产物溶于1ml色谱流动相溶液获得供试品溶液；

c.将10μl供试品溶液进行超高液相色谱-串联质谱仪检测，将测得定量离子峰面积代入上述标准曲线可获得供试品溶液中OTA的浓度。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述色谱流动相溶液由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为5mM醋酸铵0.01％甲酸水溶液；流动相流速为：0.35ml/min采用梯度洗脱，按表1所示参数进行。