[发明专利]应用伴刀豆凝集素材料富集糖蛋白或糖肽中聚糖的方法

说明书

本发明涉及凝集素亲和材料的应用领域，以改性的硅胶为基质，以伴刀豆Con A为配基，制备出SG Con A材料，根据凝集素和聚糖化合物的可逆性结合作用富集糖蛋白/糖肽，将富集得到的糖蛋白/糖肽经过酶解释放聚糖，经过富集得到聚糖，结合质谱的方法鉴定聚糖的结构和构型。本发明应用亲和固定相富集聚糖化合物，可在高效液相色谱模式和固定相萃取两种模式下分别富集糖蛋白或者糖肽，并且可将此方法应用于实际样品中聚糖化合物的分离和鉴定。

技术领域

本发明涉及凝集素亲和材料应用技术领域，涉及到以硅胶为基质，伴刀豆凝集素concanavalin A(Con A)为配基的亲和材料SG ConA的制备，以标准糖蛋白和糖肽为富集对象，评价SG Con A的基本性质，应用SG Con A制备ovalbumin糖蛋白或者糖蛋白经过胰蛋白酶(trypsin)酶解得到的糖肽，并用内切糖苷酶PNGase F(切除与天冬酰胺Asn相连的聚糖和糖蛋白/糖肽)，酶解糖蛋白/糖肽，释放糖链，经过富集得到聚糖，结合质谱表征的方法鉴定聚糖的结构，并将此评价方法应用于富集实际样品中的糖蛋白或者糖肽。

背景技术

凝集素(Lectin)是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，可以特异性的识别聚糖或者含有聚糖的糖蛋白或者糖肽，并被认为是破译聚糖构型的密码子(L.Albert,N.Miyako,H.Marina,H.William S.,The Lectin Riddle:Glycoproteins Fractionated from Complex Mixtures Have Similar GlycomicProfiles，A Journal of Integrative Biology,14(2010)487-499.)。因此凝集素亲和色谱广泛应用于糖蛋白糖肽的富集中，在蛋白质组学的分析中，多种凝集素连用的技术在复杂样品的分析中发挥着卓越的功能(P.Tatiana,W.Eric,H.William S.,H.Marina,Combination of abundant protein depletion and multi-lectin affinitychromatography(M-LAC)for plasma protein biomarker discovery,J.Proteome Res.,6(2007)662–671.；G.Francisca O.,H.Brian B.,P.Katie,G.Carolina,H.Marina,H,William S.,Characterization of Glycoproteins in Pancreatic Cyst Fluid Using aHigh-Performance Multiple Lectin Affinity Chromatography Platform，J.ProteomeRes.,13(2014)289–299.)。

在蛋白质的富集策略中，存在自上而下(从蛋白质水平)和自下而上(糖肽水平)两种富集策略，即使富集后的糖蛋白经过酶解后仍然存在着大量的非糖肽，使得应用自下而上的富集策略更为广泛(S.Bingyun,R.Jeffrey A.,U.Angelita G.,W.James T.,Y.Xiaowei,L.Biaoyang,H.Leroy,Shotgun Glycopeptide Capture Approach Coupledwith Mass Spectrometry for Comprehensive Glycoproteomics，Mol Cell Proteomics，6(2007)141-149.)。