[发明专利]一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于天然药物分离提取领域，具体涉及一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法及其应用。

背景技术

天然抗氧化物质具有清除自由基，进而具有抗衰老和预防各种疾病的作用。食药用大型真菌不但富含氨基酸、维生素、多糖、蛋白质等营养物质，而且其次级代谢产物结构类型多样，这些次级代谢具有抗氧化、抗细菌、促进神经生长因子合成、酶抑制剂、抗真菌、细胞毒、受体拮抗剂等多种生物活性。抗氧化功能是食药用菌的重要功能之一，从食药用菌中分离提取天然抗氧化物质，有助于食药用菌资源的开发利用，丰富了天然药物资源，促进人类健康发展与疾病预防。基于以上背景，开展本发明的研究。

发明内容

本发明的目的在于针对食用菌中含有丰富的天然抗氧化物质，但开发利用程度低；提供一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法及其应用。本发明制备的吡咯酸化合物有较好的抗氧化活性，且培养基原料来源广泛，制备方法简单，容易实现工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种羊肚菌，所述菌种为羊肚菌M.co 0010（Morehella esculenta），已于2014年7月6日保藏于中国 武汉 武汉大学 中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2014324。

一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，以羊肚菌为原料，经固体发酵、产物有机浸提、分离纯化得到吡咯酸化合物。

所述的利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，包括以下步骤：

（1）固体发酵：将羊肚菌活化后进行固体发酵；然后进行培养；

（2）产物有机浸提：将步骤（1）培养得到的菌丝体与培养基用有机溶剂浸提；浸提液浓缩后，用等体积的乙酸乙酯和水进行萃取；取乙酸乙酯相，经脱水、浓缩后，得到有机粗提物浸膏；

（3）分离纯化：将有机粗提物浸膏用甲醇溶解后，进行凝胶柱层析；采用薄层层析-生物自显影法（参考文献：谷丽华等.应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性. 药学学报. 2006，41(10):956-962）检测各组分的抗氧化活性，将具有抗氧化活性的组分收集、合并后，再进行反相硅胶柱层析，收集具有抗氧化活性的组分；最后再利用正相硅胶柱层析，得到具有抗氧化活性的吡咯酸化合物。

步骤（1）所述的培养其条件固体发酵的培养基配方组成为：马铃薯16-25wt%，葡萄糖1.5-2.5wt%，蛋白胨0.5-1.5wt%，1-2wt%琼脂，余量为水；自然pH，0.1 Mpa、100~140℃灭菌15~40 min，于25-28 ℃恒温培养25-35天。

步骤（2）所述的有机溶剂为乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰乙酸中的一种或多种。

步骤（3）所述的凝胶柱层析其参数为：Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱，甲醇洗脱，流速为12 s/滴，每管收集5-10mL，每试管取样进行薄层层析：展开剂为氯仿:甲醇＝10:1，显色剂为10wt%的硫酸乙醇，相似组分进行合并。

步骤（3）所述的反相硅胶柱层析其洗脱为：用甲醇与水的混合液作为洗脱剂，甲醇占混合液体积的5-30%，混合液中含有体积分数为0.1-1% 的甲酸，进行梯度洗脱；所述的正相硅胶柱层析其洗脱为：用氯仿与甲醇的混合液作为洗脱剂，体积比为40:1-120:1，洗脱剂中含有体积分数为0.1-2‰的甲酸。

一种如上所述的方法得到的吡咯酸化合物，其分子式为C₅H₅NO₂，结构式为：

。

所述的吡咯酸化合物的应用，具体为：用于制备抗氧化药物。

本发明的有益效果在于：

本发明制备的吡咯酸化合物有较好的抗氧化活性，可以利用菌株Morehella esculenta发酵制得，培养基原料来源广泛，制备方法简单，容易实现工业化生产。

附图说明

图1化合物吡咯-2-羧酸的薄层色谱图；1表示对照维生素C，2表示化合物吡咯-2-羧酸。

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。

本发明提供的吡咯酸化合物的的制备方法，其步骤为：