[发明专利]一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，其特征在于：以羊肚菌为原料，经固体

发酵、产物有机浸提、分离纯化得到吡咯酸化合物；包括以下步骤：

（1）固体发酵：将羊肚菌活化后进行固体发酵；然后进行培养；

（2）产物有机浸提：将步骤（1）培养得到的菌丝体与培养基用有机溶剂浸提；浸提液浓

缩后，用等体积的乙酸乙酯和水进行萃取；取乙酸乙酯相，经脱水、浓缩后，得到有机粗提物浸膏；

（3）分离纯化：将有机粗提物浸膏用甲醇溶解后，进行凝胶柱层析；采用薄层层析-生物自显影法检测各组分的抗氧化活性，将具有抗氧化活性的组分收集、合并后，再进行反相硅胶柱层析，收集具有抗氧化活性的组分；最后再利用正相硅胶柱层析，得到具有抗氧化活性的吡咯酸化合物；

步骤（1）所述的培养条件为：培养基配方组成为：马铃薯16-25wt%，葡萄糖1.5-2.5wt%，蛋白胨0.5-1.5wt%，1-2wt% 琼脂，余量为水；

其中所述羊肚菌，菌种为羊肚菌M.co 0010（Morehellaesculenta），已于2014 年7 月6 日保藏于中国武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2014324；

其中所述得到的吡咯酸化合物为其分子式为C₅H₅NO₂，结构式为：。

2.根据权利要求1 所述的利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步骤（1）

所述的培养其条件为自然pH，0.1 Mpa、100~140℃灭菌15~40 min，于25-28 ℃恒温培养

25-35 天。

3.根据权利要求1所述的利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步骤（2）

所述的有机溶剂为乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰乙酸中的一种或多种。

4.根据权利要求1 所述的利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步骤（3）

所述的凝胶柱层析其参数为：Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶柱，甲醇洗脱，流速为12 s/滴，

每管收集5-10mL，每试管取样进行薄层层析：展开剂为氯仿: 甲醇＝10:1，显色剂为10wt%

的硫酸乙醇，相似组分进行合并。

5.根据权利要求1 所述的利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步骤（3）

所述的反相硅胶柱层析其洗脱为：用甲醇与水的混合液作为洗脱剂，甲醇占混合液体积的

5-30%，混合液中含有体积分数为0.1-1% 的甲酸，进行梯度洗脱；所述的正相硅胶柱层析

其洗脱为：用氯仿与甲醇的混合液作为洗脱剂，体积比为40:1-120:1，洗脱剂中含有体积

分数为0.1-2‰的甲酸。