[发明专利]一种玄参繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养领域，确切地说是一种玄参繁育方法。

背景技术

玄参为玄参科植物玄参(Scrophularianingpoensis Hemsl.)的干燥根，始载于《神农本草经》，具有凉血滋阴，泻火解毒的功效，临床上用于热病伤阴、温毒发斑、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、白喉、痈肿疮毒等症，是我国特有种，目前仅在中国自然分布，全国大部分地区均有栽培，主产于浙江、安徽、湖北、贵州等地。为常用大宗药材，作为中成药的原料，可生产天王补心丸、天麻丸、脉络宁、清咽喉合剂等几十种中成药，现也运用于化妆品生产，作为植物润滑剂、防冻霜、防皱霜等。

野生玄参的繁殖方式是利用种子进行有性繁殖，而药农为了保存优质品种，提高产量及缩短生长周期等，栽培玄参均采用无性繁殖的方式，但多年来缺乏品种的提纯复壮，病毒积累严重，产量和质量大幅度下降。因此，课题组于2009年开始进行玄参的品种搜集与鉴定工作，并于同期进行脱毒快繁技术研究，2010年成功获得玄参脱毒种，2011年进行田间对比试验。

发明内容

本发明的目的在于提供一种玄参繁育方法

上述目的通过以下方案实现：

一种玄参繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、株系筛选

于玄参收获期优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃；

b、材料处理与茎尖剥取

(1)预处理与消毒

于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm³左右，在无菌条件下置于70％左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1％升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；

(2)茎尖剥取

在解剖镜下将步骤(1)处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L；

c、无性系建立

外植体接种7d左右后，生长点开始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d左右形成丛生芽，待丛生芽苗高3～5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，20d左右为一个转接周期；增殖至适当的苗量后，选生长健壮，长势一致的试管苗，分批转入诱导生根培养基，诱导生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；

d、炼苗移植

苗生根后，将瓶塞打开，移至强光照下炼苗3d左右，炼苗后，取出试管苗，用自来水小心洗去根上的培养基残留物，然后将其移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1左右的基质中，成活后的试管苗生长稳定后移栽大田。

所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：所述的无性系建立的所有操作的培养条件均为：培养温度为24～26℃，光照强度1500～2000Lx/12h.d。

所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：RT-PCR方法检测玄参花叶病毒：

最佳反应体系：复性温度59℃，上、下游引物使用浓度各为25μmol/L，镁离子作用浓度为1.5μmol/L，dNTP作用浓度为400μmol/L，35个循环。最佳反应模式为：94℃预变性5min；94℃变性45s，59℃复性40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。

所述的20d左右为一个转接周期指的是当增殖20d左右后，将茎段剪切后继续重复进行增殖培养

所述的适当的苗量由试管苗需要繁育的数量决定。

本发明的有益效果为：脱毒种苗田间表现优异，植株健壮、长势一致，叶片浓绿、肥厚、宽大，产品品质极大提高。原原种田间无病虫害发生，原种及生产种病虫害极少发生，产量较常规苗分别提高166.6％、152.8％。综合田间长势、产量、产品品质以及生产成本四个指标，形成玄参脱毒种苗繁育的最佳模式为：原原种——原种——生产种。

具体实施方式

实施例1、

一、株系筛选

玄参生长期，在亳州市谯城区进行地上片选，并于收获期在片选的基础上进行地下性状筛选，优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃。

通过品种特征鉴别，与中国植物志玄参科植物玄参性状相吻合。