[发明专利]一种玄参繁育方法

权利要求书

1.一种玄参繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、株系筛选

于玄参收获期优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃；

b、材料处理与茎尖剥取

（1）预处理与消毒

于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm³左右，在无菌条件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1%升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；

（2）茎尖剥取

在解剖镜下将步骤（1）处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5 mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6-BA1.0~1.5 mg/L；

c、无性系建立

外植体接种7d左右后，生长点开始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d左右形成丛生芽，待丛生芽苗高3~5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，20d左右为一个转接周期；增殖至适当的苗量后，选生长健壮，长势一致的试管苗，分批转入诱导生根培养基，诱导生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；

d、炼苗移植

苗生根后，将瓶塞打开，移至强光照下炼苗3 d左右，炼苗后，取出试管苗，用自来水小心洗去根上的培养基残留物，然后将其移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1左右的基质中，成活后的试管苗生长稳定后移栽大田。

2.根据权利要求1所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：所述的无性系建立的所有操作的培养条件均为：培养温度为24～26 ℃，光照强度1500～2000Lx/12 h.d。

3.根据权利要求1所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：RT-PCR方法检测玄参花叶病毒：

最佳反应体系：复性温度59℃，上、下游引物使用浓度各为25μmol/L，镁离子作用浓度为1.5μmol/L，dNTP作用浓度为400μmol/L，35个循环；

最佳反应模式为：94℃预变性5min；94℃变性45s，59℃复性40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。