[发明专利]一种快速从河蚬中分离提取多肽多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，涉及多肽多糖的提取方法。

背景技术

河蚬广泛存在于世界各地水域。它生长速度快，繁殖能力强，养殖产量大，营养丰富，味道鲜美，具有很高的食用价值和保健作用，作为中药材，具有开胃、通乳、明目、利尿、去湿毒、治疗肝病、麻疹、退热、止咳化痰和解酒等功效。然而目前对河蚬资源的利用，虽已研制开发出了浓缩蚬汁高级调味品和蚬精(台湾地区产)等产品，但大多仍以鲜食或制成蚬干、咸蚬、罐头等产品为主，深加工率还较低，致使其经济价值没有被充分发挥。

传统分离提取多肽多糖的方法，往往是为了获取多肽，在加工的过程中破坏了多糖的结构和活性，导致活性多糖的浪费；或者为了得到多糖，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法等方法进行脱蛋白处理，导致了蛋白质的浪费。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种操作简单方便、分离效果好、得率高的多肽多糖分离方法。

本发明的技术方案为：一种快速从河蚬中分离提取多肽多糖的方法，按如下步骤。

（1）河蚬预处理：鲜活河蚬吐砂两天，经热水漂烫，剥壳取肉，将河蚬肉放到捣碎机中捣碎。

（2）酶解：在蛋白质质量百分比含量为1-2%的河蚬液中，加入质量百分比1.5-2.5%的Alcalase碱性蛋白酶，调节pH为8-9，温度为45-55℃酶解3小时，90℃、10-15min灭酶，离心取上清液。

（3）多肽分离：利用大孔吸附树脂柱分离多肽，上样流速为1-2BV/h，上样浓度为10-30mg/ml，水清洗，速率为2-4BV/h；然后，用质量百分比60-80%的乙醇以1-3ml/min的流速进行解析，解析液经旋转蒸发浓缩、冷冻干燥即得河蚬多肽粉。

（4）多糖分离：将步骤（3）中的水清洗液加入离子交换层析柱中，分别用0.1-2mol/LNaCl溶液与去离子水以1-3ml/min的流速过层析柱，分步收集，合并相同组分，经40-60℃旋转蒸发浓缩后，用去离子水透析24-48h，将透析液冷冻干燥即得河蚬多糖干粉。

本发明先将蛋白质酶解为小分子的肽，小分子的肽利于人体的吸收利用，同时还具有一些特殊的生理活性。用大孔吸附树脂进行吸附解析分离，操作简单，反应过程温和，不会导致糖结构的破坏，然后用离子交换层析柱进行分离多糖，使得多肽多糖得到分离，可以同时收集多肽多糖，得率较高。

本发明的优点在于：1、本发明同时分离纯化了多肽和多糖，既没有导致多肽的浪费又没有浪费掉多糖，而且此方法获得的多肽多糖纯度高，得率高。2、本发明在整个过程中操作简便，反应条件温和，使得多肽多糖的结构得以保留未被破坏。3、本发明方法得到的多肽具有良好的溶解性、流动性、吸湿性、乳化起泡性和抗氧化性能。4、本发明方法得到的多糖具有良好的抗氧化性和抗肿瘤性能。

具体实施方式

本发明将通过以下实施例作进一步说明。

实施例1。

（1）河蚬预处理：鲜活河蚬放在清水中吐砂两天，清洗干净，热水漂烫剥壳取肉。

（2）绞肉：将河蚬肉放到捣碎机中捣碎。

（3）酶解：在蛋白质质量百分比含量为1%的河蚬液中，加入质量百分比1.5%的Alcalase碱性蛋白酶，调节pH为8，温度为45℃酶解3小时。

（4）灭酶：90℃10min灭酶，离心取上清液。

（5）多肽分离：利用DA201-C大孔吸附树脂分离多肽，上样流速为1BV/h，上样浓度为10mg/ml，水清洗速率为2BV/h，质量百分比70%的乙醇以1ml/min的流速进行解析，解析液经旋转蒸发浓缩、冷冻干燥即得河蚬多肽粉。

（6）多糖分离：取步骤（3）中水清洗液加入DEAE-纤维素-52层析柱中，分别用0.8mol/LNaCl溶液与去离子水以1ml/min的流速过层析柱，分步收集，合并相同组分，40℃旋转蒸发浓缩后，用去离子水透析24h，将透析液冷冻干燥即得河蚬多糖干粉。

实施例2。

（1）河蚬预处理：鲜活河蚬放在清水中吐砂两天，清洗干净，热水漂烫剥壳取肉。

（2）绞肉：将河蚬肉放到捣碎机中捣碎。

（3）酶解：在蛋白质质量百分比含量为1.5%的河蚬液中，加入质量百分比2%的Alcalase碱性蛋白酶，调节pH为8.5，温度为50℃酶解3小时。

（4）灭酶：90℃15min灭酶，离心取上清液。