[发明专利]一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法

权利要求书

1.一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法，其特征在于,采用的方法步骤具体如下：

（1）巴西蕉茎尖薄片的EMS诱变：将直接购买的巴西蕉(Musa AAA Cavendish subgroup CV．Brazil)吸芽在无菌条件下将切好的巴西蕉茎尖2-3mm左右薄片，其中根部薄片弃之，直接泡在含EMS诱变剂中处理30min；

（2）香蕉茎尖薄片的枯萎病粗毒素多轮连续筛选：经EMS突变处理后的巴西蕉茎尖薄片植入到设置的培养基中，在27℃，光照周期12（光照）/12（黑暗）条件下培养30天，诱导出再生植株；将存活的再生植株继续切成薄片加有含40μg/ml镰刀菌酸浓度的香蕉枯萎病粗毒素的上述设置的培养基为选择压力诱导再生植株，同样条件培养，诱导出再生植株再切成薄片以同样条件连续筛选诱导7轮，PH至5.8;

所述的设置培养基含MS基本盐十30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+改良的维生素/氨基酸溶液+4mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA;

（3）再生苗生根：连续筛选诱导7轮后的无菌苗接入生根培养基，40天后长出完整根系后方可进行炼苗，并最终获得枯萎病抗性得到显著提高的香蕉苗植株。

2.如权利要求1所述的一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法，其特征在于,巴西蕉茎尖切好为2-3mm左右薄片，直接泡在含EMS 200mMol/L 浓度的诱变剂中；EMS 200mMol/L浓度配置采用：将EMS原液先用无菌水稀释，再用0.1mol/L，Ph=5.6的磷酸缓冲液稀释。

3.如权利要求1所述的一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法，其特征在于，所述的改良的维生素/氨基酸溶液配方：1.19μmol／L的维生素B1，0.97μmol／L的维生素B6，0.13μmol／L 的D-泛酸钙，1.62μmol／L的烟酸，0.01μmol／L的叶酸，26.64μmol／L的甘氨酸，113.57μmol／L的抗坏血酸，0.07μmol／L的氨基苯酸，56.82μmol／L 的L-半胱氨酸，0.01lμmol／L的核黄素，555.06μmol／L的肌醇，370.94μmol／L的硫酸腺喋呤，551.88μmol／L的酪氨酸。

4.如权利要求1所述的一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法，其特征在于, 所述的香蕉枯萎病菌粗毒素液采用，将香蕉枯萎病4号生理小种（F.oxysporum f sp.cubense 4）在查彼氏培养基于（25±2）℃，120r/min的振荡摇床中培养12d，滤去菌丝后，滤液经8000rpm离心20min，取上清液无菌过滤，滤液即为粗毒素液，-20℃保存备用。

5.如权利要求1所述的一种利用香蕉茎尖薄片提高香蕉植株枯萎病抗性的方法，其特征在于, 所述的生根培养基配方采用MS基本盐+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+3%蔗糖+0.7%琼脂+10%椰子水，PH至5.8。