[发明专利]丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及丹参药材中水溶性成分含量测定方法及其应用，属于中药检测技术领域。

背景技术

丹参(拉丁学名：Salvia miltiorrhiza Bunge)又名赤参，紫丹参，红根等。根入药，含丹参酮，为强壮性通经剂，有祛瘀、生新、活血、调经等效用，为妇科要药，主治子宫出血，月经不调，血瘀，腹痛，经痛，经闭，庙痛。对治疗冠心病有良好效果。此外亦治神经性衰弱失眠，关节痛，贫血，乳腺炎，淋巴腺炎，关节炎，疮疖痛肿，丹毒，急慢性肝炎，肾孟肾炎，跌打损伤，晚期血吸虫病肝脾肿大，癫癎。外用又可洗漆疮。

丹参的主要化学成分分为脂溶性和水溶性两大类：丹参的脂溶性成分大多为共轭醌、酮类化合物，丹参的水溶性成分主要为酚酸类物质。丹参的主要药理作用为可降低沙土鼠和大鼠缺血性脑卒中的发病率和死亡率，减轻缺血后引起的脑水肿，改善冠脉循环，对心肌缺血和心肌梗死保护，改善微循环，改善血液流变性，抑制凝血、激活纤溶，抑制血小板功能和抗血栓形成，稳定红细胞膜，抗肝纤维化，降血脂和抗动脉粥样硬化，促进组织的修复与再生作用等。

丹参品种、产地和采收期的不同会造成其成品质量的差异。为保证产品质量的稳定性，对其水溶性成分的含量测定及指纹图谱研究较多。《丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱研究》(周欣等，色谱，2005年03期，292～295)中公开了一种丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱的检测方法。

现有技术中，丹参药材中水溶性成分含量测定及指纹图谱检测中，一般只测定其中一至两种成分的含量。为了减少分开多次测定丹参药材不同水溶性成分含量而产生的误差，如果能一次性测定多种成分的含量，不仅可以节约时间和成本，还可以使得同一系统条件下的测试结果更稳定、可靠。然而目前尚未有同时测定和检测丹参多种组分的含量以及指纹图谱的相关报道。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用，能够同时测定丹参药材中多种水溶性成分的含量，并检测其指纹图谱，所述测定方法对丹参药材中水溶性成分的分离效果好，具有快速、准确、高重现性、高回收率的特点。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，所述方法是以丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品为对照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90为流动相梯度洗脱的超高效液相色谱法。

具体的含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为276～306nm；流速为0.1～0.5mL·min-1；柱温为25℃～35℃；理论板数按按丹酚酸B峰计算应不低于2000；

(2)对照品溶液的制备：取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：取丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL 5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。

前述含量测定方法中，步骤(1)中检测波长为286nm，流速为0.2mL·min-1，柱温为30℃。

丹参药材中水溶性成分的含量测定方法在丹参药材指纹图谱检测中的应用。

前述含量测定方法的应用，是用指纹图谱软件对含量测定方法中得到的17分钟内的色谱图进行处理，即得丹参药材水溶性成分的指纹图谱。