[发明专利]基于磁性纳米粒子-PAMAM纳米复合材料的金花茶中黄酮类物质分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种基于磁性纳米粒子-PAMAM纳米复合材料的金花茶中黄酮类物质分离方法。

背景技术

金花茶是世界上稀有的珍贵植物。与银杉、桫椤、珙桐等珍贵“植物活化石”齐名，是我国八种国家一级保护植物之一，属《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅱ中的植物种，最早于1993年为我国植物学家左景烈在广西防城发现。目前世界上己知金花茶组物40个品种和5个变种，主要分布在越南及我国广西境内的亚热带南缘和热带北缘地区。

卫生部2010年第9号文件，批准金花茶、显脉旋覆花(小黑药) 、诺丽果浆、酵母β-葡聚糖、雪莲培养物等5种物品为新资源食品。研究发现，金花茶叶和花中富含总黄酮(异黄酮、双黄酮、花色苷及新黄酮类等)、茶多酚，多种氨基酸及微量元素等。

黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物，是色原烷的衍生物，其特点是具有C6-C3-C6的基本骨架。黄酮类化合物可以分为10多个类别：黄酮、黄烷醇、异黄酮、双氢黄酮、双氢黄酮醇、噢弄、黄烷酮 、花色素、查耳酮、色原酮等，现已发现约4000余种黄酮类化合物，主要存在于植物的叶、果实、根、皮中，实验证明其具有广泛的生理和药理活性（包括抗氧化，清除氧自由基、抗病毒、抗癌、抗炎、抗衰老等），因此对该化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门话题。传统提取方法主要包括超滤法、酶解法、大孔树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波法、微波场提取法等（张睿，徐雅琴，时阳. 黄酮类化合物提取工艺研究. 食品与机械，2003，01，21-22），但往往制约于提取效率或成本。

目前关于金花茶中黄酮类物质活性成分研究大多局限在传统紫外、色谱检测或溶剂浸提、膜分离等，如：湛志华对金花茶叶中的化学成分进行了定性分析。通过定性分析，发现金花茶叶中黄酮类化合物约占2.33%（湛志华. 金花茶叶中黄酮成分的提取与分离[D]. 广西师范大学, 2006）；彭晓等采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法、ODS柱色谱法、反复重结晶等方法对金花茶花的化学成分进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析等方法进行结构鉴定。从金花茶花的乙醇提取物中分离得到包括黄酮类物质在内的13个化合物（彭晓，于大永，冯宝民，唐玲， 王永奇，史丽颖. 金花茶花化学成分的研究. 广西植物， 2011，31（04）， 550-553 ）。唐前等采用紫外分光光度法测定金花茶、毛瓣金花茶、凹脉金花茶、四季金花茶、薄叶金花茶不同植物部位中总皂苷、总多酚(鞣质)、总黄酮的含量。如金花茶花蕾醇提物中总皂苷、总多酚(鞣质)、总黄酮的含量依次为: 21.30%、6.56%、21.76%（唐前,罗燕英,王永奇等.金花茶组植物化学成分的定量分析，时珍国医国药，2009，20（4）,769-771）；陈全斌等以金花茶叶为原料提取黄酮,黄酮经水解,溶剂萃取、柱层析等手段,得到高纯度甙元;经熔点、TLC、液相色谱、红外光谱、核磁共振法等分析手段进行结构表征,首次证实金花茶叶含有黄酮甙,其甙元为槲皮素和山奈酚（陈全斌，湛志华，张巧云，廖娜. 金花茶叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征. 广西热带农业，2005，6，10-11）。

张彩霞等采用微波辅助提取白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)中的黄酮类化合物,并优化其提取工艺,对提取物的化学结构进行鉴定,发现影响黄酮提取率的因素主次顺序为:提取温度乙醇浓度提取时间料液比；最佳提取工艺为:乙醇浓度为80%,提取时间为40 min,料液比为1∶40,提取温度为80℃,在此条件下白花蛇舌草中黄酮的提取率达2.86%（张彩霞，蔡定建，方文英.白花蛇舌草中黄酮提取工艺的优化及其结构鉴定. 安徽农业科学，2011, 39（01），131-133）；李加林等通过正交实验探讨了提取温度、提取时间、料液比及乙醇浓度对盐肤木总黄酮提取率的影响。提取时间为10 min,温度为60℃,料液比为1∶60,乙醇浓度为70%时提取效率最佳。研究结果显示在最佳条件下总黄酮提取率达到6.65%。李加林， 吴素珍， 卑占宇. 盐肤木总黄酮提取工艺研究. 时珍国医国药， 2009， 20，1116-1117）。