[发明专利]一种快速检测无乳链球菌的分子信标探针及检测方法

权利要求书

1.一种快速检测无乳链球菌的分子信标探针，其特征在于，所述分子信标探针的碱基序列为：

Beacon SAG：5’-FAM-CACCATTCTGCTCCGAAGAGAAAGCTGGTG-DABCAL-3’；

所述探针的5’端用FAM标记，3’端用DABCAL标记，荧光基团激发波长495nm，检测波长520nm。

2.如权利要求1所述的分子信标探针，其特征在于，所述分子信标浓度为10ng/μL。

3.一种快速检测无乳链球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)裂解液：4％氢氧化钠；

(2)杂交液：10％(w/v)硫酸葡聚糖，10mM NaCl，20％(v/v)甲酰胺，0.1％(w/v)焦磷酸钠，0.2％(w/v)聚乙烯基吡咯烷酮，0.2％(w/v)聚鹿糖，5mM Na2EDTA，0.1％(v/v)TritonX-100，50mM Tris/HCl(pH 7.5)，10ng/μL分子信标探针，所述分子信标探针的碱基序列为：

Beacon SAG：5’-FAM-CACCATTCTGCTCCGAAGAGAAAGCTGGTG-DABCAL-3’；

(3)终止液：1％稀硫酸；

(4)洗涤液：5mM Tris，15mM NaCl，0.1％(v/v)Triton X-100，pH值为10。

4.一种利用权利要求3所述试剂盒快速检测无乳链球菌的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)吸取10μL样品滴在载玻片上，自然风干；

(2)在风干的样品上加入10μL裂解液，待其自然风干后，浸入无水乙醇中，浸泡5分钟；

(3)在样品上加入10μL杂交液，置于杂交炉中52℃杂交10分钟；

(4)用终止液侵泡1分钟，终止反应；

(5)滴加封片剂后，用荧光显微镜镜检，用20×物镜扫视和计数，用60或100×物镜观察细菌形态。