[发明专利]GI基因组型诺如病毒逆转录滚环扩增方法

权利要求书

1.一种用于检测I型诺如病毒的引物组，其特征在于，所述的引物组包括逆转录扩增引物和锁式扩增的引物、探针和连接片段；其中逆转录引物的核酸序列为SEQ ID NO:1-2；检测I型诺如病毒的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6；连接片段的核酸序列为SEQ ID NO:7。

2.如权利要求1所述的用于检测I型诺如病毒的引物组，其特征在于，还包括有提高逆转录产物浓度的引物，其核酸序列为SEQ ID NO:3-4。

3.一种检测I型诺如病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有权利要求1所述的引物组。

4.如权利要求3所述的检测I型诺如病毒的试剂盒，其特征在于，还包含有权利要求2所述的提高逆转录产物浓度的引物。

5.权利要求3或4所述的试剂盒在非用于疾病诊断、治疗目的检测I型诺如病毒中的应用。

6.一种利用权利要求4所述的试剂盒检测I型诺如病毒的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下步骤：

1)待检测病毒RNA的提取：

用病毒RNA提取试剂盒提取待检测样品的病毒RNA；

2)用核酸序列为SEQ ID NO:1-2的逆转录引物逆转录扩增样品的病毒RNA得到逆转录产物；

3)滚环扩增步骤：用步骤2)的逆转录产物为模板，用检测I型诺如病毒的核酸序列分别为SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6的引物和核酸序列为SEQ ID NO:7的连接片段进行扩增，扩增温度为60℃，恒温水浴反应60min，80℃加热2min，终止反应；

4)结果检测：扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定，电泳后在琼脂糖凝胶上形成阶梯状的条带为阳性样品。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中，用核酸序列为SEQ ID NO:3-4的引物再次扩增核酸序列为SEQ ID NO:1-2的逆转录引物逆转录扩增样品的病毒RNA得到逆转录产物。