[发明专利]一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种金针菇多糖的提取方法，尤其涉及一种利用复合酶解协同高压热水浸提法从金针菇中快速、高效提取多糖的新工艺。

背景技术

金针菇（Flammulina velutiper (Fr.) Sing），学名毛柄金钱菌，属担子菌纲伞菌目白蘑科金钱菌属，是最常见的食用菌之一。其营养丰富，多糖为其主要有效成分。研究表明，金针菇多糖具有广泛的药理活性，可抑制肿瘤的发生、发展与转移，并能增强体液免疫和细胞免疫，具有抗逆转录病毒活性和降血脂、抗衰老、护肝等作用，且毒副作用很小。目前实验室多采用热水浸提法，或以超声波、微波及酶等辅助热水浸提。这些方法不仅浸提时间长，而且提取率普遍不高。而在目前企业所采用的金针菇多糖生产工艺中，多采用热水浸提法，能耗大，提取时间长，且提取率不高。  

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的缺点，提供一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法，即提供一种可以部分取代现有生产工艺的简便易行、高效、快速、成本低并减少环境污染的新方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法，包括以下步骤：

一、按照料液比为1:30~70g/mL的比例向金针菇子实体干粉中加入缓冲液，再加入一定量的复合酶进行的酶解反应，其中复合酶的添加量为金针菇子实体干粉质量的0.5~1.5%，反应时间为50~90 min，酶解温度为30~70℃，酶解pH值为3~7。

二、酶解后，进行高压热水浸提，控制浸提温度为75~121℃，浸提时间为40~120 min。

三、提取后进行离心，取上清液，浓缩，采用Sevage法除蛋白，离心，将上清液醇沉过夜，离心，所得沉淀用无水乙醇洗涤2~3次，将沉淀干燥得到金针菇多糖。

本发明中，所述金针菇子实体干粉，是经高速粉碎机粉碎后过60目筛得到的。

本发明中，所述缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

本发明中，所述料液比优选1:60g/mL。

本发明中，所述复合酶由比活力为10000U/g的纤维素酶和比活力为50000U/g的木瓜蛋白酶按1:1的质量比混合而成。

本发明中，所述复合酶的添加量优选为金针菇子实体干粉质量的1.25%。

本发明中，所述酶解反应时间优选80 min、酶解温度优选50℃、酶解pH值优选6。

本发明中，所述高压热水浸提温度优选108℃，浸提时间优选80 min。

本发明中，所述高压浸提后对离心的上清液所采取的浓缩方法可以是减压浓缩或在70℃水浴下蒸发浓缩到原体积的1/2。

本发明中，所述Sevage法除蛋白是采用氯仿-正丁醇混合溶液（体积比为4:1的混合液）按与样物提取液4:1(v:v)添加，充分振摇30 min后静置12 h。

本发明中，所述醇沉是将除蛋白后经离心得到的上清液与95%乙醇按1:3(v:v)混合，置4℃下沉淀12 h。

本发明中，所述离心都是以3500 r/min的转速离心15 min。

本发明具有如下优点：

1、由于复合酶解法提取具有效率高，产品质量好，反应条件更加温和等优点，而高压提取又可将被提取物的组织细胞及亚细胞结构解体，使细胞内的化学成分与溶媒充分接触得到直接溶解。本发明通过复合酶解和高压热水浸提相结合的方法提取金针菇中的多糖，提高了金针菇多糖的提取率。经本发明方法生产的金针菇多糖提取率可达12.18%。

2、本发明有效提高了原料利用率，且节约能源，工艺路线简捷，设备投入少，是一种金针菇综合加工利用的有效方法，易于生产和推广，是一种金针菇综合加工利用的有效方法。

附图说明

图1为苯酚-硫酸法的标准曲线；

图2为DNS法的标准曲线；

图3为不同方法提取金针菇多糖得率的比较。

具体实施方式

下面对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

本发明提供了一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法，具体内容如下：

1、材料与方法

1.1试验材料