[发明专利]一种利用赤霉菌制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法

说明书

一种利用赤霉菌制备3β，7α，15α‑三羟基雄甾‑5‑烯‑17‑酮的方法，其特征是所述方法包括以下步骤：(1)菌体培养液的制备，将保藏号为CGMCC No.4903的赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1作为生产菌种，经斜面培养、菌体培养得到菌体培养液；(2)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液中加入富马酰壳聚糖和DHEA，富马酰壳聚糖与菌体培养液的重量体积比为1∶50～100，DHEA的终浓度为8.5～10g/L，在26～30℃下，200～220r/min的搅拌转速下转化36～60h，即得转化液；(3)产物提取，将转化液用乙酸乙酯提取浓缩，得到3β，7α，15α‑三羟基雄甾‑5‑烯‑17‑酮。

技术领域

本发明甾体化合物生物转化方法具体的设计一种羟化方法。

背景技术

屈螺酮是一种新型的孕激素，因其具有一定的盐皮质激素作用，在用于制备口服短效避孕药时，可以克服一般孕激素带来的体重增加的副作用。3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮(即7α，15α-二羟基去氢表雄酮，简称7α，15α-diOH-DHEA，CAS：2963-69-1)则是生产屈螺酮的重要中间体，因合成困难，一般采用或去氢表雄酮(DHEA)生物转化法生产。

中国专利CN102965288A公开了一种用于将DHEA转化为3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的赤霉菌(Gibberellaintermedia)CA3-1(保藏编号为CGMCC No.4903)，可以实现高浓度投料与高产物得率，其在常规发酵工艺下，投料浓度达到5-8g/L，底物转化率达到68-84％，且随着投料浓度提高，其底物转化率出现了显著的降低，当投料浓度达到8g/L时，转化率仅有68％。

因此在采用赤霉菌将DHEA转化为3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的生物发酵中，进一步优化发酵条件，提高底物的转化率和投料浓度，成为现有技术中亟待解决的问题

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种改进的利用赤霉菌制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法，在研究中为我们惊奇的发现，现有技术中通常被用作抑菌剂的某种壳聚糖衍生物，能够意外的提高赤霉菌发酵制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮时的转化率和投料浓度。

本发明提供了一种利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3-1制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法，所述赤霉菌保藏编号为CGMCC No.4903，所述方法包括以下步骤：

(1)菌体培养液的制备，将保藏号为CGMCC No.4903的赤霉菌(Gibberellaintermedia)CA3-1作为生产菌种，经斜面培养、菌体培养得到菌体培养液；

(2)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液中加入富马酰壳聚糖和DHEA，富马酰壳聚糖与菌体培养液的重量体积比为1∶50～100，DHEA的终浓度为8.5～10g/L，在26～30℃下，200～220r/min的搅拌转速下转化36～60h，即得转化液；

(3)产物提取，将转化液用乙酸乙酯提取浓缩，得到3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮。

所述的富马酰壳聚糖的取代度为0.45～0.48。

所述的方法，其特征是斜面培养的培养基为PDA培养基，其组成为成分及配比为：土豆淀粉200～500g/L；葡萄糖30～50g/L；酵母粉5～10g/L；琼脂粉15～20g/L以及余量的蒸馏水；