[发明专利]一种利用赤霉菌制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法

权利要求书

1.一种利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3-1制备3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法，所述赤霉菌保藏编号为CGMCC No.4903，其特征是所述方法包括以下步骤：

(1)菌体培养液的制备，将保藏号为CGMCC No.4903的赤霉菌(Gibberellaintermedia)CA3-1作为生产菌种，经斜面培养、菌体培养得到菌体培养液；

(2)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液中加入富马酰壳聚糖和DHEA，富马酰壳聚糖与菌体培养液的重量体积比为1:50～100，DHEA的终浓度为8.5～10g/L，在26～30℃下，200～220r/min的搅拌转速下转化36～60h，即得转化液，所述的富马酰壳聚糖的取代度为0.45～0.48；

(3)产物提取，将转化液用乙酸乙酯提取浓缩，得到3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮。

2.如权利要求1所述的一种利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3-1制备3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法，其特征是斜面培养的培养基为PDA培养基，其组成为成分及配比为：土豆淀粉200～500g/L；葡萄糖30～50g/L；酵母粉5～10g/L；琼脂粉15～20g/L以及余量的蒸馏水；

所述用于菌体培养的培养基为菌体培养基，所述菌体培养基的成分及配比为：葡萄糖20～50g/L；NaCl 0.5～2g/L；酵母粉10～30g/L；K₂HPO₄ 0.1～5.0g/L；FeSO₄·7H₂O 0.01～0.1g/L；及余量的蒸馏水，调培养基的pH至6.5-7.5。

3.如权利要求1或2所述的一种利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3-1制备3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的方法，其特征是所述菌体培养液的制备工艺为：

斜面培养，将接种菌种的培养基斜面置于28-32℃，培养3-5天，得到成熟的孢子菌丝，菌体培养分为一次培养和二次培养两步；

一次培养，用接种环挑斜面培养得到的一环菌丝接种于有80～120mL菌体培养基中，在26～30℃下震荡培养18-36h得到一次培养液；

二次培养，将一次培养液以体积百分比3-6％的接种量接入菌体培养基中，以与一次培养相同的条件继续培养18-36h，得到菌体培养液。