[发明专利]蜚蠊抗肝纤维化活性提取物的制备及检测方法

说明书

本发明涉及一种蜚蠊提取物的制备方法及检测方法，制备方法包括：将蜚蠊成虫杀死干燥后粉碎；将所得粉末加入醇溶剂进行提取并过滤；将所得滤液减压浓缩至浸膏无醇味；在油水分离装置中加入所得浸膏和热水，进行搅拌，静置后放出水层，收集滤液并过滤；将蜚蠊脱脂提取物经过大孔吸附树脂柱吸附，再用水及不同浓度的醇洗脱；将所得洗脱液过滤、减压浓缩、干燥后粉碎，即得抗肝纤维化的活性提取物；分别测定提取物活性成分中总肽、粘多糖、多元醇及游离氨基酸的含量，当前对于蜚蠊提取物多用于烫伤、烧伤、组织修、口腔护理及心血管疾病方面的应用，本发明使蜚蠊的药用价值得到进一步的提升。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种蜚蠊抗肝纤维化活性提取物的制备方法和活性组分的检测方法。

背景技术

蜚蠊(Blattodea)属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，俗称蟑螂。它在地球上已经生存了4亿年，是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。蜚蠊一直被人类视为害虫，但它面对人类的各种杀灭手段却能顽强繁衍至今，其体内无疑具有最优秀的生物活性物质和特殊生理机制。

近年来，随着我国对传统中医药资源研究开发的重视，科学工作者对这一资源丰富的昆虫进行了应用方面的研究开发，取得了可喜的成就，并以蜚蠊药材为原料，先后研发的新药有：“康复新液”、“肝隆胶囊”、“心脉隆注射液”，其中“肝隆胶囊”和“心脉隆注射液”为国家级二类新药(中药)。“康复新液”用于治疗口腔溃疡、十二指肠溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、肺结核辅助治疗等，为国家中药保护品种、国家医保乙类药物；“肝隆胶囊”用于治疗慢性乙型肝炎，肝硬化及乙肝病毒携带等肝脏疾病；“心脉隆注射液”主治慢性充血性心力衰竭，慢性肺原性心脏病，对继发性肺心病、心肌病的心衰治疗效果特别明显。郝芳芳等研究了美洲大蠊(periplaneta americana，为蜚蠊的一种)乙醇提取物对免疫性肝纤维化大鼠肝功能的影响[文献：郝芳芳，李春艳，赖泳，等.美洲大蠊对免疫性肝纤维化大鼠肝功能的影响[J].安徽农业科学，2012,40(18):9717.]，结果表明美洲大蠊乙醇提取物对免疫性肝纤维化具有一定的防治作用，能明显改善肝功能；甘平等的研究结果显示美洲大蠊乙醇提物具有抗CCl4和ConA所致肝损伤的作用[文献：甘平，张旭强，何旭，等.美洲大蠊提物对小鼠急性肝损伤的保护作用[J].现代药物与临床，2011,26(2):123-128.]。

为了明确蜚蠊药材中具有抗肝纤维化作用的活性部位，进一步弄清其中起主要作用的物质基础，并从分子药理学基础上阐明蜚蠊抗肝纤维化的作用机制，发明人对其展开了详细的药学工艺研究。发明者采用不同浓度的醇提，提取方法采用工业生产常用的冷浸或热提两种方法，精制过程选用价格较低、易于反复再生利用的大孔树脂对蜚蠊提取物进行研究，并结合体内外实验进行活性追踪，得到具有抗肝纤维化作用较强的活性部位。

本发明首先选用不同浓度的乙醇对蜚蠊进行提取，得到粗提物，并采用大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)对粗提取物进行活性筛选，筛选出活性最强的粗提取物，然后选用多种大孔树脂为分离材料，对活性粗提取物进行分离纯化，同时采用健康清洁级SD大鼠建立肝纤维化模型，对分离纯化得到的蜚蠊提取物进行抗肝纤维化药理活性实验，通过数理统计分析，筛选得到抗肝纤维化活性最强的活性提取物。

本发明的优势在于：①蜚蠊资源丰富，目前已完全实现人工饲养，全国每年产量达600多吨以上；②本发明得到的蜚蠊提取物具有安全、有效，质量可控、无毒副作用的优势；③本发明工艺所用到的提取、分离、纯化材料为环保、安全、可反复再生利用的材料，如醇、大孔树脂；④蜚蠊系列药品的研发是云南省重点培育的五大系列“云药”特色产品之一，该项研究成果得到的天然产物，将为研发安全、有效、资源丰富、具有较强抗肝纤维化作用的新药奠定基础，使这一资源丰富的药用昆虫更好地为人类服务。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种乙醇提取、大孔吸附树脂纯化，制备蜚蠊抗肝纤维化作用的提取物的制备及检测方法。

本发明中蜚蠊具有抗肝纤维化的有效部位提取物的制备方法如下：