[发明专利]适用于多基因型的西瓜体细胞胚高效诱导及植株再生方法

权利要求书

1.适用于多基因型的西瓜体细胞胚高效诱导及植株再生方法，其特征在于：包括以下步骤：

前处理：将西瓜种子剥去种皮后进行灭菌，再将种胚接种在含TDZ的MS培养基进行培养，每瓶接种8粒，接种后先置于黑暗条件下培养3 d，培养温度为23-27℃，再转移到光照时间为16 h/d的条件培养3 d，培养温度为23-27℃，光照强度为3000 lx，TDZ的浓度为0-0.1 mg/L，培养基中添加30 g/L的蔗糖和6.0 g/L的琼脂，pH值调至6；

愈伤组织的诱导：切取子叶外植体，放入含6-BA和 IAA的1/2 MS培养基中，先置于黑暗条件下培养7 d，再转移到光照时间为16 h/d的条件培养14 d，培养温度为23-27℃，光照强度为3000 lx，6-BA的浓度为2-4mg/L，IAA的浓度为0.01-0.5mg/L，培养基中添加30 g/L的蔗糖和6.0 g/L的琼脂，pH值调至6；

体细胞胚的诱导：将步骤2）所得愈伤组织放入含6-BA和 IAA的1/2 MS培养基中，在光照时间为16 h/d的条件培养28 d获得体细胞胚，培养温度为23-27℃，光照强度为3000 lx，6-BA的浓度为2-4mg/L，IAA的浓度为0.01-0.5mg/L，培养基中添加30 g/L的蔗糖和6.0 g/L的琼脂，pH值调至6；

完整植株的形成：将步骤3）所得的体细胞胚放入装有不含激素的1/2 MS培养基的培养瓶中进行培养，培养时间为28 d，培养温度为23-27℃，光照强度为3000 lx，光照时间为16 h/d，培养基中添加30 g/L的蔗糖和6.0 g/L的琼脂，pH值调至6；

5）炼苗：选取经步骤4）培养后的具有3个以上叶片和5-6 cm强直根的健壮小苗，将培养瓶的盖子先拧松放置2 d，再半开2 d，然后再全开2 d，半开和全开盖子期间需要不断补充水分；

6）移栽：将炼苗完成后的植株拔起，用水洗净根部培养基，移栽到装有泥炭土、珍珠岩、草木灰和腐叶土基质的营养钵中，在23-27℃下，套上保鲜袋置于人工气候箱中保湿培养，1-2周后再移到室外进行培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）所述的灭菌过程为：剥去西瓜种子的种皮，先用75%的酒精浸泡消毒1min，再用0.1%升汞浸泡消毒5min，最后用无菌水冲洗5次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤6）所述营养钵中泥炭土、珍珠岩、草木灰和腐叶土基质的质量比为1:1:1:1。