[发明专利]一种重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种人血清中重组人肿瘤坏死因子受 体-抗体融合蛋白浓度测定方法。

背景技术

肿瘤坏死因子(tumournecrosisfactor,TNF)，又叫恶病质因子(cachectin)，按 其结构分两型：TNF-α和TNF-β，其中由活化的巨噬细胞、单核细胞和T细胞产 生的能使肿瘤坏死的因子称为TNF-α；而把由活化的T细胞和NK细胞产生的淋 巴毒素(lymphotoxin,LT)称为TNF-β。目前研究较多的是TNF-α，它是一种由157 个氨基酸组成、相对分子质量为17kD的可溶性多肽，成熟型TNF-α的活性形式 为三聚体。

TNF-α具有广泛的生物学活性，对免疫细胞有活化、促增殖和分化等作用， 例如：参与淋巴细胞的迁移、活化、增殖与分化以及淋巴组织的再生，对某些非 肿瘤细胞和大多数肿瘤细胞具有诱导凋亡的作用，具有强大的抗肿瘤作用，是迄 今发现的抗瘤作用最强的细胞因子，对肿瘤细胞具有直接的抑制增殖和细胞坏死 作用。TNF-α对其他细胞(包括心肌细胞)的生长分化也有影响，同时还有抗病毒 及细菌，激活T细胞，促进IL-1、IL-2、IL-6的产生及分泌，诱发炎症反应，促 进IL-2R、EGFR等的表达等功能，在宿主防御反应中起重要作用。TNF-α具有 双重生物学效应，在浓度较低时，TNF-α主要作为白细胞和内皮细胞的自分泌及 旁分泌的调节物，参与抵抗细菌、病毒和寄生虫的感染，促进组织修复及调节炎 症反应，引起肿瘤细胞凋亡等；在高浓度时，过量的TNF-α在体内的大量产生 和释放则会破坏机体的免疫平衡，与其他炎症因子一起产生多种病理损伤。 TNF-α对众多的组织器官产生生物学效应，是细胞因子网络中一个重要的多功能 成员，是机体维持内部自稳、抵御各种致病因子必不可少的免疫调节因子。

TNF-α参与机体的多种病理生理过程，包括发热、炎症、创伤愈合、免疫 调节、病毒复制、变态反应、胰岛素抵抗和肿瘤杀伤等。当机体处于病理状态时， TNF-α对清除受损细胞、维持机体内环境平衡起着重要的作用,是维持机体内部 稳定、抵御各种致病因子必不可少的免疫调节因子。肿瘤坏死因子-α生产的失调 被认为与许多人类疾病有关，包括阿兹海默氏症、癌症、重性抑郁障碍和肠炎。 在某些免疫性疾病如：中重度类风湿关节炎、强直性脊柱炎、中重度寻常型银屑 病中，肿瘤坏死因子-α水平升高，引起炎症反应。炎症得不到有效治疗，疾病就 会发展，最终会造成骨和关节的破坏，以及银屑病皮损迁延不愈。

TNF-α的生物学活性主要是通过细胞膜上的特异受体传递信号而实现的。 TNF-α受体(TNFR)广泛存在于肝、肺、肾、肠道及肌肉组织中。TNF-α与靶细 胞膜上的TNFR结合产生生物学效应，通过受体后效应将信息传递到胞核，使 mRNA表达并进而合成蛋白质。

TNF-α受体(TNFR)有2种，即相对分子质量分别为55000的TNFRI(p55)和 75000的TNFRII(p75)，存在于多种正常及肿瘤细胞表面。两类TNFR均为糖蛋 白，氨基酸顺序分析显示两类受体胞外区域的氨基酸顺序高度相似，但胞内区域 则完全不同。TNFR与TNF-α和TNF-β的结合具有高度亲和力，其KD值均在 pmol水平。由于各种细胞表达TNFR存在差异，使得TNF-α对各种细胞的作用 不同，由此表现出其功能及其程度的多样性。一般来说，受体数目越高越容易受 到TNF-α的损伤。

TNF-α等细胞因子一方面与脏器细胞膜上的受体结合产生效应；另一方面， 细胞因子与循环中的可溶性受体结合，使循环中的细胞因子减少,但在组织中的 表达却增加，其在局部中的过度生成导致脏器损害。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体Fc抗体融合蛋白(rhTNFRII：Fc)是一种采用 基因重组技术生产的融合蛋白，其一端为TNFRII胞外区，一端为人IgG1的Fc 端。它通过与可溶性、膜型TNF－a相结合，特异性阻断TNF－a与细胞表面受 体的相互作用，阻断TNF－a介导的炎症反应，从而治疗因TNF-α失调所导致的 类风湿关节炎、强直性脊柱炎及银屑病等自身免疫疾病。