[发明专利]ACE C-结构域选择性抑制肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于功能性食品配料制备技术领域，具体涉及一种ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法。 

背景技术

血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC3.4.15.1)是心血管疾病治疗中的重要靶标之一。通过肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)和激肽释放酶-激肽系统(kallikrein-kinin system,KKS)，ACE对血压、电解质和体液平衡、心血管系统发育和结构重塑等方面起着重要的调节作用，ACE抑制剂(ACEI)现已成功地作为治疗高血压的一线药物应用于临床。 

ACE已被证实是一种肽链被高度糖基化的含锌二肽羧酶，可将无活性的AngⅠ转化为具有血管收缩活性的AngⅡ，同时还能催化具有舒张血管作用的舒缓激肽(bradykinin,BK)的降解，因此体内ACE活性过高，易导致高血压。ACE分子中存在着两个同源程度较高的结构域，即C-结构域和N-结构域，但它们在底物特异性、催化能力、氯离子激活以及发挥的生理功能方面存在着较大差别。 

长期以来受限于对ACE的分子结构与作用机理的认知水平，对ACE抑制活性的研究大多还未上升到分子结构域选择性水平，当前所认识到的ACE抑制肽多为结构域混合型ACE抑制肽。近年来的研究成果表明：选择性抑制ACE C-结构域活性不仅可有效调节机体血 压，而且可保留N-结构域对舒缓激肽的水解活性，从而避免舒缓激肽在组织中的过度累积而导致干咳、水肿等副作用，因此ACE C-结构域选择性抑制肽比当前普遍应用的结构域混合型ACE抑制肽更安全且无副作用。目前为止，国内外尚未见食源性ACE C-结构域选择性抑制肽的研究报道。 

目前对各种食源性活性肽的常规筛选方法为：间歇酶解→色谱分离→活性检测→再分离→再活性检测，直至得到纯活性肽组分。间歇式酶解方式尽管操作简便，反应易于控制，但缺点是生产效率较低、酶使用成本高、不同批次产品品质不稳定等；另一方面，采用多种色谱联用技术筛选酶解产物，不仅过程繁琐耗时，难以实现快速、高通量筛选目的，而且肽回收率低。 

发明内容

本发明是为解决上述问题进行的，基于ACE C-结构域选择性抑制肽相对分子质量较小，且与ACE C-结构域活性位点存在较强非共价相互作用这一基本科学理论，以燕麦分离蛋白为原料，采用酶膜耦合联用高特异性亲和色谱技术进行ACE C-结构域选择性抑制肽的高效制备与筛选。 

为解决上述问题，本发明采用了如下技术方案： 

本发明提供了ACE C-结构域选择性抑制肽，用于抑制ACE中C-结构域活性，其特征在于：ACE C-结构域选择性抑制肽的序列为Gly-Tyr以及Ile-Arg-Pro中的任意一种。 

本发明提供了一种ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以燕麦分离蛋白为原料， 

步骤1，配制质量浓度为5％-10％燕麦分离蛋白溶液，并调节溶液的pH值为8.0～8.5，置于酶膜反应器的反应罐中，温度控制在40℃～50℃，按酶/底物(质量比)为1.0％～3.0％在蛋白溶液中加入胰蛋白酶，开启循环泵，开始酶膜反应，收集膜透过液，得到燕麦蛋白水解产物； 

步骤2，将步骤1中的燕麦蛋白水解产物干燥后溶解于碳酸氢铵溶液中，在亲和色谱柱上进行亲和吸附，至滤出物在214nm处出现最大吸收并趋于平稳为止； 

步骤3，对步骤2中的亲和色谱柱进行洗脱，得到目标肽溶液； 

步骤4，对步骤3中的目标肽溶液进行浓缩、分离纯化、序列解析以及抑制活性验证，得到ACE C-结构域选择性抑制肽。 

本发明提供的ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法，还可以具有这样的特征：酶膜反应器中的膜为超滤膜或纳滤膜，超滤膜或纳滤膜的截留分子量为6000Da～10000Da，过滤压力为0.8～1.0Mpa。 

本发明提供的ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法，还可以具有这样的特征：酶膜反应过程中，利用0.1mol/L的NaOH溶液进行滴定，控制酶解液pH为8.0～8.5。 

本发明提供的ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法，还可以具有这样的特征：酶膜反应结束后，对得到的燕麦蛋白水解产物进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度和出风温度分别控制在170℃～190℃和90℃～110℃。 

本发明提供的ACE C-结构域选择性抑制肽的制备方法，还可以 具有这样的特征：酶膜反应的反应时间为3-4小时。