[发明专利]猪支原体肺炎灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种猪支原体肺炎灭活疫苗，其特征在于：按体积比计，由水相和油相按照1：1-3的比例组成；其中，所述水相由吐温-80和猪肺炎支原体菌液按照2-5：95-98的比例组成；所述油相由聚氧乙烯40氢化蓖麻油、司本-80和白油按照1-2：5-8：90-94的比例组成。

2.按照权利要求1所述的猪支原体肺炎灭活疫苗，其特征在于：由水相和油相按照1：1的比例组成。

3.按照权利要求1所述的猪支原体肺炎灭活疫苗，其特征在于：所述水相由吐温-80和猪肺炎支原体菌液按照4：96的比例组成；所述油相由聚氧乙烯40氢化蓖麻油、司本-80和白油按照1：6：93的比例组成。

4.一种制备权利要求1-3任何一项所述的猪支原体肺炎灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)培养猪肺炎支原体菌液，收获菌液；(2)加入灭活剂将猪肺炎支原体菌液灭活；(3)制备油相和水相；将油相和水相混合，乳化；(4)将乳化好的疫苗定量分装，密封，即得。

5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中采用发酵罐培养猪肺炎支原体菌液；所述的培养方式如下：按发酵罐容积5％-20％的容积量将猪肺炎支原体接种到培养基中，在以下条件进行培养：温度37℃、pH值7.0、搅拌转速40-60r/min，通气培养15-96小时，逐步扩大培养，收获菌液。

6.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述灭活剂为二乙烯亚胺，其终浓度达到2mmol/L；加入灭活剂后在37℃下搅拌培养至少24小时；然后加入硫代硫酸盐灭菌水溶液中和过剩的二乙烯亚胺，在37℃下再连续搅拌培养至少24小时。

7.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述油相的制备方法包括以下步骤：按体积比计，将白油90-94份加热到100℃，加入聚氧乙烯40氢化蓖麻油1-2份，混匀，将油温降到50℃以后加入司本-805-8份搅拌均匀，125℃灭菌30分钟，冷却后即得；

所述水相的制备方法包括以下步骤：按体积比计，取灭菌的吐温-802-5份、猪肺炎支原体菌液95-98份，混合，搅拌至吐温-80完全溶解，即得。

8.按照权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述油相的制备方法包括以下步骤：按体积比计，将白油93份加热到100℃，加入聚氧乙烯40氢化蓖麻油1份，混匀，将油温降到50℃以后加入司本-806份搅拌均匀，125℃灭菌30分钟，冷却后即得；所述水相的制备方法包括以下步骤：按体积比计，取灭菌的吐温-804份、检验合格的猪肺炎支原体菌液96份，混合，搅拌至吐温-80完全溶解，即得。

9.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中水相和油相按照1：1-3的体积比混合；优选的，将水相和油相按照1：1的体积比混合；所述的乳化是以4,000r/min乳化30min。

10.权利要求4-9任何一项所述制备方法制备得到的猪支原体肺炎灭活疫苗。