[发明专利]一种检测破壁鲜嫩果蔬原料中的细胞破壁率的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测方法技术领域，特别涉及一种检测破壁鲜嫩果蔬原料中的细胞破壁率的方法。

背景技术

植物细胞是植物生命活动与功能的基本单位，由原生质体和细胞壁两部分组成，所有营养、功能均包含在原生质体内。植物细胞壁的存在在一定程度上影响了人体对食材中营养功能成分的快速吸收。因此，在人体食用前，使用各种“破壁技术”打破食材中植物细胞的细胞壁，可以提高人体对营养功能成分的吸收效率和吸收速度。

“破壁技术”是一种常用的食品加工技术。按照是否存在外加作用力，可分为机械法和非机械法；按照物理和非物理方法可分为物理法和化学法。物理方法中根据破壁温度又可分为低温物理破壁，超低温物理破壁；根据用力情况也可分为高速撞击破壁、剪切力破壁等，非物理方法主要有化学试剂法及生物酶解法。目前，食品加工过程中常用的一些操作方式如搅拌、打浆、粉碎、挤压等均属于破壁技术中的一种。市场上售卖的各种各样的搅拌机、打浆机实际上就是一种细胞破壁机，其主要原理就是采用一些新型材料、通过设计不同的刀片形状、增加电机马力加大转速等办法将搅拌、打浆、粉碎等技术集合一起，使原料在短时间内达到高破壁率的效果。为衡量某种设备或某种技术的功能作用大小，我们常常需要利用原料处理前后破壁细胞的数量多少(即细胞破壁率的高低)来作比较，因此针对不同原料制定细胞破壁率的检测方法是非常重要的。

目前，最成熟的检测方法就是针对花粉和孢子类原料制定的细胞破壁率的检测方法，国家也有相关标准(如NY/T 1677-2008破壁灵芝孢子粉破壁率的测定)，因为可以将破壁前后的原料加入某种合适溶剂制成相同浓度的均匀悬浮液，然后通过制片，在显微镜下(带血球计数板)直接观察并统计出具有完整细胞壁的花粉或孢子的数量，以此计算细胞破壁率。另外，就干燥的中草药原料而言，应用超细粉碎技术对细胞破壁率的影响研究方面也有论文发表(主要为湖南中医药大学超微工程技术研究中心发表的论文)，其中也涉及到细胞破壁率的计算方法，但其中一个明显的缺陷就是用细粉(100目)中的显微特征物的数量作为细胞未破碎的基数以此计算细胞破壁率，最后得出的破壁率明显超高，数据不准确，方法也难以令人信服。

就鲜嫩的果蔬原料如苹果、西瓜、西红柿、甜菜根、小白菜等而言，目前未见有关于细胞破壁率检测方法方面的论文报道。其原因主要在于实验过程中没办法使破壁前原料中的单个细胞分离且在分离过程中要求细胞尽量不受到损伤，也就无法计算一定质量或一定体积的中未破壁的细胞数，因此也没办法检测这一类原料使用破壁加工技术之后的细胞破壁率的大小，即目前没办法比较某种破壁加工技术或某种破壁加工设备对此类原料的作用大小。

发明内容

为了克服现有技术中存在的不足和缺点，本发明的目的在于提供一种检测破壁鲜嫩果蔬原料中的细胞破壁率的方法。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种检测破壁鲜嫩果蔬原料中的细胞破壁率的方法，按照以下操作步骤：

(1)制备完整细胞测试液：将鲜嫩果蔬原料剪成规格长×宽×高为0.1cm×0.1cm×0.1cm并混匀；精密称取1.00g上述剪碎并混匀的材料置于普通陶瓷研钵中，同时准备50.00ml溶剂备用；用研杵在研磨速度为10～12转/分钟、研磨力度小于0.05牛顿的情况下将原料在研钵中均匀研磨5～7分钟；研磨过程中根据原料的不同加入0～5ml备用溶剂于研钵中以方便研磨；研磨结束后，将浆液倒入容器中，并用上述备用溶剂多次洗涤研钵和钵杵至转移干净为止；合并浆液、洗涤液和剩余备用溶剂，此液体则为完整细胞测试液；

(2)制备破壁细胞测试液：精密称取1.00g经过破壁加工技术处理的待测鲜嫩果蔬原料置于容器中，加入50.00ml溶剂，搅拌制成悬浮液，此悬浮液即为破壁细胞测试液；

(3)细胞破壁率的检测

a、准备能够应用血球计数板进行计数的显微镜和血球计数板；

b、分别摇匀或用玻棒搅匀上述完整细胞测试液和破壁细胞测试液后立即进行取样和装片处理，装片时要使测试液布满血球计数板上的整个玻片；取样体积为0.5μl；

c、装片后将玻片置于显微镜下观察，调整显微镜焦距，确定合适的观察倍数；

d、在显微视野下，根据原料的不同，选择适宜的显微特征物作为细胞破壁率测定的典型显微特征物并进行计数。

e、按以下公式计算细胞破壁率：细胞破壁率(％)＝(完整细胞测试液中典型显微特征物数量-破壁细胞测试液中典型显微特征物数量)/完整细胞测试液中典型显微特征物数量×100％。