[发明专利]一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法

说明书

技术领域

本发明涉及荧光技术领域，尤其是涉及一种基于聚集诱导发光原 理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法。

背景技术

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的一种成分，又称之为脂多糖 (LPS)，被其污染的临床用注射液进入人体后可引起发热、微循环障 碍、内毒素休克以及播散性血管内凝血等毒性反应。

目前检测内毒素的方法主要为鲎试验，根据不同的鲎试剂产品， 其具体试验方法可分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色 法和终点显色法。凝胶法为半定量检测内毒素方法，仅适合样品内毒 素的限量检测；动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度 测定仪器及配套软件；终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计 进行检测，对软硬件设施要求较高，而且动态显色法和终点显色法所 需试剂价格昂贵，终点浊度法相对应试剂目前未见商品化产品，其应 用受到一定限制。

目前，上述的内毒素检测方法中均无采用荧光分析法，而基于荧 光的检测方法具有简便、灵敏、快速和直观的优势。此外，AIE (aggregation-inducedemission，聚集诱导发光)特性的荧光探针在分 散状态时不发光，而在聚集状态时发出强荧光，利用这种特性研发了 许多检测生物活性分子的新方法，例如用于检测ATP分子(Manchun Zhao,MingWang,HuajieLiu,etal.Continuouson-sitelabel-freeATP fluorometricassaybasedonaggregation-inducedemissionofsilole. Langmuir2009,25,676-678；TakaoNoguchi,TomohiroShiraki,Arnab Dawn,etal.NonlinearfluorescenceresponsedrivenbyATP-induced self-assemblyofguanidinium-tetheredtetraphenylethene.Chem. Commun2012,48,8090–8092)、检测乳酸分子(XiangShen,Guanxin ZhangandDeqingZhang.Anewfluorometricturn-ondetectionof L-lacticacidbasedonthecascadeenzymaticandchemicalreactionsand theabnormalfluorescentbehaviorofsilole)和检测肝素分子(Ming Wang,DeqingZhang,GuanxinZhang,etal.Theconvenientfluorescence turn-ondetectionofheparinwithasilolederivativefeaturingan ammoniumgroup.ChemCommun2008,4469–4471)等，原理是利用 AIE探针与检测底物分子作用后形成聚集体发出强荧光，从而检测 ATP、乳酸和肝素等分子。但目前无利用AIE特性制备用于检测LPS 荧光探针的报道，尤其是临床用注射用液中LPS的定性和定量检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及 其制备方法、应用和利用荧光探针的聚集诱导发光特性和去碘离子荧 光淬灭效应快速、直观地定性或定量检测内毒素方法，解决现有技术 中内毒素检测技术不足的问题。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种基于聚集诱导发 光原理的荧光探针(TPE-Be-I)，其分子式为C₃₇H₃₀INS，结构式为：

本发明还提供了上述荧光探针的制备方法，包括下述步骤：

A、4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)的合成：将1- (4-溴苯基)-1,2,2-三苯基乙烯(TPE-Br)溶于四氢呋喃溶剂中并置 于-88℃～-68℃温度条件下，缓慢向反应瓶中滴加丁基锂；滴加完毕 后，在-88℃～-68℃温度条件下反应，反应后将哌啶缓慢加入反应液 中形成混合物，之后回到室温继续反应；反应完毕后，混合物倒入水 中，用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁 干燥，最后将有机溶剂蒸干，以正己烷和二氯甲烷作为洗脱剂通过柱 层析分离得到产物4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)；