[发明专利]一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法

权利要求书

1.一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针，其特征在于，荧光探针3-乙基-2-(4-1,2,2-三苯基乙烯)烯基-苯并噻唑碘盐(TPE-Be-I)的分子式为C₃₇H₃₀INS，结构式为：

。

2.一种权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

A、4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)的合成：将1-(4-溴苯基)-1,2,2-三苯基乙烯(TPE-Br)溶于四氢呋喃溶剂中并置于-88℃～-68℃温度条件下，缓慢向反应瓶中滴加丁基锂；滴加完毕后，在-88℃～-68℃温度条件下反应，反应后将哌啶缓慢加入反应液中形成混合物，之后回到室温继续反应；反应完毕后，混合物倒入水中，用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，最后将有机溶剂蒸干，以正己烷和二氯甲烷作为洗脱剂通过柱层析分离得到产物4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)；

B、3-乙基-2-甲基-苯并噻唑碘盐(Be-I)的合成：将苯并噻唑和碘乙烷溶于乙腈中进行回流反应；反应完毕后，将沉淀物过滤，并用乙腈洗涤沉淀物，得到产物3-乙基-2-甲基-苯并噻唑碘盐(Be-I)；

C、荧光探针(TPE-Be-I)的合成：将TPE-CHO和Be-I溶于干燥的乙醇中，氮气保护下进行回流反应；反应完毕后，将有机溶剂蒸干，以二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂通过柱层析分离得到产物荧光探针(TPE-Be-I)。

3.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤A中，在-88℃～-68℃温度条件下反应2小时～4小时；在常温下反应1小时～3小时；在步骤B中，回流反应时间为20小时～28小时；在步骤C中，在氮气保护下进行回流反应时间为40小时～60小时。

4.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤A中，所述1-(4-溴苯基)-1,2,2-三苯基乙烯(TPE-Br)与丁基锂的摩尔比为5：6；所述1-(4-溴苯基)-1,2,2-三苯基乙烯(TPE-Br)与哌啶的摩尔比为1：2；所述TPE-Br在四氢呋喃溶剂中的摩尔浓度为0.05mol/L～0.14mol/L。

5.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤B中，所述苯并噻唑与碘乙烷的摩尔比为1：2，其中所述苯并噻唑在所述乙腈中的摩尔浓度为0.25mol/L～0.4mol/L。

6.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤C中，步骤A中得到的产物得到产物4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)与步骤B中得到的产物3-乙基-2-甲基-苯并噻唑碘盐(Be-I)之间的摩尔比为1：1，其中步骤A中得到的产物得到产物4-(1,2,2-三苯基乙烯)-苯甲醛(TPE-CHO)与步骤B中得到的产物3-乙基-2-甲基-苯并噻唑碘盐(Be-I)在所述乙醇中的摩尔浓度分别为0.03mol/L～0.04mol/L。

7.一种权利要求1所述的荧光探针在检测内毒素中的应用。

8.一种利用权利要求1所述的荧光探针检测内毒素的方法，其特征在于，包括下述步骤：

S1、将荧光探针(TPE-Be-I)溶入DMSO溶液中，制备储存液；

S2、分别吸取储存液与待测溶液进行混合，混合均匀得到检测反应体系；

S3、对检测反应体系的荧光进行分析检测。

9.根据权利要求8所述的荧光探针检测内毒素的方法，其特征在于，在步骤S1中，储存液中荧光探针(TPE-Be-I)的摩尔浓度为1mmol/L～2mmol/L；

在步骤S2中，所述待测溶液为临床用葡萄糖注射液、HEPES缓冲液、超纯水或其他不含有能置换探针中碘离子的成分的液体，吸取1μL的储存液与99μL的待测溶液混合，混合均匀后得到100μL的检测反应体系(pH＝6～7.5)。

10.根据权利要求8所述的荧光探针检测内毒素的方法，其特征在于，在步骤S3中，在UV灯激发下观察荧光对内毒素进行定性检测，UV灯激发波长为365nm；和/或者通过荧光分光光度仪检测荧光强度，对内毒素进行定量检测，荧光分光光度仪中使用的激发波长为400～450nm，采集500～700nm区间的荧光。