[发明专利]单纯疱疹病毒1型实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒有效

专利信息
申请号: 201410588741.6 申请日: 2014-10-29
公开(公告)号: CN105624329B 公开(公告)日: 2019-07-12
发明(设计)人: 王瑞靖;于明辉;居金良 申请(专利权)人: 上海仁度生物科技有限公司
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/6844
代理公司: 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 代理人: 鲁兵
地址: 201201 上海市*** 国省代码: 上海;31
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 单纯 疱疹病毒 实时 荧光 核酸 恒温 扩增 检测 试剂盒
【说明书】:

发明公开了一种单纯疱疹病毒1型(human herpesvirus 1,HSV‑1)实时荧光核酸恒温扩增检测盒,具体包括:捕获探针、HSV‑1引物T7引物和nT7引物、HSV‑1检测探针、M‑MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶等试剂。本发明方法能够高特异性、高灵敏度、低污染、快速地对含有单纯疱疹病毒1型的拭子、刮取液、脑脊液样品进行核酸扩增检测,具有检测效率高,准确度高的特点,具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及病毒的生物检测技术领域,具体涉及将特异性靶标捕获技术和实时荧光核酸恒温扩增检测技术结合的单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的实时荧光核酸恒温扩增检测中使用的引物、探针及相关试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒在全球分布广泛,人群中极易感染,潜伏和复发感染者较多,患者和病毒携带者都是该病毒的传染源,病毒可通过呼吸道、口腔、皮肤、粘膜的直接接触或性接触途径进入机体,潜居在人体的正常粘膜、血液、唾液以及感觉神经节细胞内。原发性感染多为隐性,大多无临床症状或者呈亚临床表现,仅少数可出现临床症状。HSV-1型的原发感染常局限在口咽部尤以龈口炎最为多见。临床表现为牙龈和咽颊部成群疱疹、发热、咽喉痛,破溃后形成溃疡。此外还可引起脑炎、皮肤疱疹性湿疹。成人可引起咽炎和扁桃体炎。正常人群中约50%以上人为本病毒的携带者。该病毒可在鸡胚绒毛尿囊膜上以及人、猴、鸡等的动物培养细胞中大量地增殖。HSV的动物感染宿主较多,包括家兔、豚鼠及小鼠等实验模型生物。HSV在多种细胞中能增殖,常用原代兔肾、人胚肾细胞以及地鼠肾等传代细胞培养分离病毒。

新生儿疱疹是临床上常见而又严重的感染,据相关统计死亡率高达50%,存活者中严重损伤者也超过50%。单纯疱疹病毒通过母体产道感染新生儿,包括皮肤、眼和口腔的局部损伤;脑炎;引起死亡的内脏脓毒血症等感染类型。早期抗感染能够有效的减少死亡率。妊娠妇女感染HSV-1型,病毒有可能经胎盘感染胎儿,会影响胚胎细胞的分裂和增殖,使之发生先天畸形。早孕时感染会使流产几率增大3倍,孕晚期感染会使早产明显增多,还会引起宫内发育迟缓、智力低下、小头、小眼、心脏异常、肢体畸形或痉挛性瘫痪、脑发育不良、脑积水等。

目前,HSV常用的检查有培养法、Real-Time PCR法、血清学检查及其他抗原试验等多种选择。培养法非常耗时,设备要求高,而且只能检查有症状的患者,无症状患者样本中,敏感度较低,不足50%,这使得大部分的HSV感染者直接被漏检,而且无法区分HSV-1与HSV-2;细胞学检查,不能区别HSV感染或水痘-带状疱疹病毒感染,特异性差;酶联免疫法法(ELISA)需要过夜包被抗原,无法达到快速、定量检测的效果;免疫荧光法(IFA)在检查无症状患者样本时,其敏感度在35%~70%范围,结果判断很大程度依赖的临床主观经验。乳胶凝集试验(LA)敏感性较差。核酸检测主要是Real-Time PCR法,需要经历几十个温度变化的循环过程,扩增反应时间长,且产物为DNA,易污染。因此,开发一种快速、灵敏、特异且不易污染的检测试剂盒非常必要。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Testing,简称SAT)是一种直接快速检测RNA的方法,与检测DNA的实时荧光PCR相比,不同之处,前者检测体系多了一个逆转录反应的步骤,核酸扩增在一个温度下进行(42℃),无需热循环。采用M-MLV逆转录酶和T7 RNA聚合酶进行核酸扩增,相对于其它核酸扩增技术,反应抑制物更少,能有效减少假阴性结果。然而,SAT技术在不同种类病毒的检测中应用所面临的问题各不相同,需要具体分析病毒的特性进行专门设计。目前尚无针对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的实时荧光核酸恒温扩增检测技术的研究报道。

发明内容

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海仁度生物科技有限公司,未经上海仁度生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410588741.6/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top