[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶及其在合成他汀类药物中间体中的应用

权利要求书

1.一种分离的葡萄糖脱氢酶，其是由SEQ ID No:1所示氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶的分离的核酸。

3.根据权利要求2所述的核酸，其是由SEQ ID No:2所示核苷酸序列组成的。

4.包含权利要求2或3所述的核酸的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其选自质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其是pET21a。

7.包含权利要求4-6任一项所述重组表达载体的重组表达转化体。

8.根据权利要求7所述的重组表达转化体，其是大肠杆菌。

9.根据权利要求8所述的重组表达转化体，其是E.coli BL21(DE3)。

10.一种重组葡萄糖脱氢酶的制备方法，其包括如下步骤：培养权利要求7-9任一项所述的重组表达转化体，以及从培养物中获得重组葡萄糖脱氢酶。

11.一种催化半缩醛进行氧化反应形成内酯的催化剂，其选自权利要求7-9任一项所述的重组表达转化体的培养物，或通过将该培养物离心分离后得到的转化体细胞或者用其加工的制品。

12.权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶，权利要求10所述的方法制备的重组葡萄糖脱氢酶，或权利要求11所述的催化剂在催化半缩醛进行氧化反应形成内酯化合物中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，所述的半缩醛化合物选自如下式Ι所示的化合物：

其中，

X选自离去基团、叠氮基、具有1～6个碳原子的叠氮烷基、-CN、-OH、或-COOR₁基团；R₁选自具有1～6个碳原子的烷基或具有6～12个碳原子的芳基；

R为H或羟基保护基。

14.根据权利要求13所述的应用，其中，R为H、碳链长度为1～8个碳原子的烷基或苄基。

15.根据权利要求13所述的应用，其中，X选自卤素、磺酸酯基团、酰氧基；苯乙酰氧基、烷氧基、芳氧基、或者R₂R₃NCH₂；其中R₂、R₃各自独立地选自H、具有2～7个碳原子的烷氧羰基、具有8～14个碳原子芳基烷氧基羰基、具有6～12个碳原子的芳基磺酸酯基、具有7～19个碳原子芳基烷基、具有2～7个碳原子的烷基酰基或邻苯二甲酰亚氨基。

16.根据权利要求13所述的应用，其中，X为Cl，R为H。

17.根据权利要求13所述的应用，其中，式Ι的化合物为(4R,6S)-6-氯代甲基-2,4-二羟基-四氢吡喃。

18.根据权利要求13-17任一项所述的应用，其中所述的半缩醛化合物在反应液中的浓度为1～100g/L，葡萄糖脱氢酶的用量为0.1～10g/L，任选地，所述反应液中还添加0～1.0mM的吡咯喹啉醌(PQQ)，反应在振荡或搅拌条件下进行，反应温度为10～40℃。

19.一种合成6-取代甲基-4-羟基-四氢吡喃-2-酮的方法，包括使用权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶，权利要求10所述的方法制备的重组葡萄糖脱氢酶，或权利要求11所述的催化剂催化半缩醛进行氧化反应形成内酯化合物。