[发明专利]一种基于PCR的核酸传感器快速检测方法

权利要求书

1.一种基于PCR的核酸传感器快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）设计得到一对针对待检物目标序列的特异性引物，分别记为F-Primer和R-Primer；

2）设计一段与特异性引物F-Primer的5’端Tag序列互补的序列，记为序列T；设计一段与特异性引物R-Primer的5’端Tag序列互补并3’端巯基修饰的序列，记为序列A；合成一段特异性引物R-Primer的5’端Tag序列，记为序列C；

3）将序列T与序列C分别固定于硝酸纤维素膜上，序列A的3’端进行修饰后的序列与胶体金连接，得到金标产物B；

4）提取样品总RNA/基因组DNA，将总RNA通过反转录获得cDNA；将cDNA/基因组DNA样品、特异性引物F-Primer和特异性引物R-Primer置于含有Taq聚合酶的PCR扩增反应体系中进行扩增，得到扩增产物；

5）扩增产物与金标产物B混合后，置于步骤3）已处理的硝酸纤维素膜上进行侧向层析，通过胶体金层析试纸检测扩增产物中是否存在与序列T互补的末端带单链Tag序列的双链DNA，确定待检物是否存目标序列。

2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述序列A的3’端进行修饰后的序列与胶体金连接是指将序列A的3’端进行巯基修饰后与胶体金颗粒连接，或者序列A的3’端进行biotin修饰，用胶体金颗粒链霉亲和素标记，通过biotin与链霉亲和素结合从而使序列A与胶体金颗粒结合。

3.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述特异性引物F-Primer和特异性引物R-Primer的5’端分别连接有Tag序列，特异性引物序列与Tag序列通过C9九个碳原子进行连接。

4.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述步骤4）中采用特异性引物F-Primer和特异性引物R-Primer进行PCR扩增时，Taq聚合酶延伸至C9九个碳原子位点时延伸终止，扩增产物为双向末端带单链Tag序列的双链DNA。

5.根据权利要求1-3之一所述的快速检测方法，其特征在于，所述特异性引物序列与Tag序列的连接点为任意一种可终止Taq聚合酶延伸的修饰。

6.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述胶体金层析试纸是单链核酸快速检测试纸。