[发明专利]一种海洋弧菌褐藻胶裂合酶的纯化方法

权利要求书

1.一种从海洋弧菌发酵液中纯化褐藻胶裂合酶的方法，其特征在于，该方法包括：

（1）将弧菌QY101发酵所得的发酵液离心，弃去沉淀，保留上清液；

（2）上清液用截留分子量为50-100kDa的超滤膜进行超滤，去除大分子蛋白，收集滤出液；然后把滤出液利用截留分子量为1-10kDa的超滤膜浓缩2-10倍，收集被超滤膜截留的液体；浓缩液加入等体积的50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5-7.5），再次用截留分子量为1-10kDa的超滤膜浓缩2-10倍，收集被超滤膜截留的液体；

（3）以平衡缓冲液(50mmol/L磷酸盐，pH6.5-7.5)平衡DEAESepharoseHighPerformance柱2-10个柱体积，将上步所得浓缩液上样至层析柱；用平衡缓冲液冲洗层析柱，将未结合的蛋白去除；用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离心转速为3000-12000r/min，离心温度为0-30℃，离心时间为5-30min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的平衡缓冲液为50mmol/L磷酸盐（pH6.5-7.5），所述的洗脱缓冲液为含有0.4MNaCl的50mM的磷酸盐（pH6.5-7.5）。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的弧菌发酵液体积从0.1升到1000升。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所得到的褐藻胶裂合酶纯度达到75%，回收率达到45%以上。