[发明专利]一种鉴别新城疫Lasota疫苗毒株和基因Ⅶ型流行毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴别新城疫Lasota疫苗毒株和基因Ⅶ型流行毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒由反转录混合液、一扩混合液、二扩混合液、阴性对照和阳性对照组成；

所述反转录混合液由DEPC处理灭菌水、2.5m mol·L^-1dNTP、5×AMV Buffer 、25 μmol·L^-1 NDV-1F上游引物、5U/μL AMV反转录酶和40U/μL HPR I RNA酶抑制剂组成；每个反应体积比为10：4：4：1：0.5：0.5，共计20μL，50个反应共计1000μL，装成1管；

所述一扩混合液由灭菌三蒸水、10×PCR Buffer、2.5m mol·L^-1dNTP、25 μmol·L^-1 NDV-1F上游引物、25 μmol·L^-1 NDV-1R下游引物、5U/μL rTaq DNA聚合酶组成，每个反应体积比为17：2.5：2：0.5：0.5：0.5，共计23 μL，50个反应共计1150μL，装成1管；

所述二扩混合液由灭菌三蒸水、10×PCR Buffer、2.5m mol·L^-1dNTP、25 μmol·L^-1 NDV-2F上游引物、25 μmol·L^-1 NDV-2R下游引物、NDV-3F上游引物、25 μmol·L^-1 NDV-3R下游引物、5U/μL rTaq DNA聚合酶组成，每个反应体积比为16：2.5：2：0.5：0.5：0.5：0.5：0.5，共计23 μL，50个反应共计1150μL，装成1管；

所述阴性对照为灭菌三蒸水，每个反应对照为250μL，50个反应共计12500μL，分装成10管，每管为1250μL；

所述阳性对照为Lasota疫苗株鸡胚培养尿囊液，每个反应对照为250μL，50个反应共计12500μL，分装成10管，每管为1250μL；

所述的引物NDV-1F序列为：5’- GCTAACTCCGTTGCCGACT -3’；

所述的引物NDV-1R序列为：5’- AAGCTTGTATAAAGCAGCTG -3’；

所述的引物NDV-2F序列为：5’- ATGGGCYCCAGACCTTCTAC -3’；

所述的引物NDV-2R序列为：5’- CTGCCACTGCTAGTTGTGAT -3’；

所述的引物NDV-3F序列为：5’- ACCTCGAGGAGGGAGCCT -3’；

所述的引物NDV-3R序列为：5’- TAGCGATATTCAGCCATAC -3’。