[发明专利]一种检测大肠杆菌的电化学传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测大肠杆菌的电化学传感器，其特征在于从内到外依次为电极、普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物层、大肠杆菌抗体层、牛血清白蛋白封闭层。

2.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物层厚度为90±5nm，大肠杆菌抗体层厚度为120±10nm，牛血清白蛋白封闭层厚度为100±10nm。

3.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物层是通过以下步骤得到的：

（1） 多壁碳纳米管进行羧基化；

（2）制备纳米金；

（3）使用步骤（1）和（2）得到的产物制备普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物。

4.根据权利要求3所述的电化学传感器，其特征在于普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物中普鲁士蓝：碳纳米管：金质量比为2:2:1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的电化学传感器，其特征在于

（1）电化学传感器用磷酸缓冲液冲洗之后，在E.coli溶液中孵育，再次用PBS冲洗，干燥后在大肠杆菌菌液中孵育完全，干燥后滴加HRP标记的大肠杆菌抗体，HRP标记的抗体通过与目标物之间的强识别能力，被修饰在电极表面；

（2）采用三电极系统，以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，修饰电极为工作电极，以含对苯二酚和双氧水的PBS为工作底液采用差分脉冲伏安法检测，电位设置为-0.2到0.6 V，脉冲宽度0.05V，脉冲宽度扫描为0.06 S，进行检测。

6.一种权利要求1-5中任一项所述的电化学传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）制备普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物，滴加到经过处理的电极表面，室温干燥，得到普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物层；

（2）在普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物层上滴加无标记的大肠杆菌抗体，干燥，得到大肠杆菌抗体层；

（3）在大肠杆菌抗体层外包覆牛血清白蛋白，得到牛血清白蛋白封闭层。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物的制备方法如下：

1）多壁碳纳米管羧基化，

2)制备纳米金，

3) 制备普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于多壁碳纳米管羧基化是通过以下步骤得到的：

 称取200 mg的多壁碳纳米管，加入160.0 mL的浓硫酸和浓硝酸的混合液中，其中浓硫酸和浓硝酸的体积比为3：1，混合均匀，离心，离心后倒去上清液加入去离子水水洗，继续离心，直到上清液呈中性，干燥即得。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于普鲁士蓝-碳纳米管-纳米金复合物是通过以下步骤得到的：

(1) 4 mg羧基化的多壁碳纳米管分散到40.0 mL 0.01 M 的FeCl₃溶液中；

(２)边搅拌边将40.0 mL 0.01 M的K₃Fe（CN）₆溶液逐滴加入步骤（1）得到的FeCl₃溶液中；

(3) 将步骤（2）得到的溶液在10000 r/min条件下不断离心，倒去上清液，直到上清液呈无色；

(4) 沉淀物经收集、干燥，分散到质量分数为0.1 %的4.0 mL壳聚糖水溶液中，得到修饰PB-CNTs的氨基基团；

(5) 在10000 r/min条件下离心去除剩余壳聚糖；

(6) 将已完成氨基修饰的PB-CNTs加入金胶体中搅拌2均匀，离心分离即得。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于牛血清白蛋白的浓度为0.1%。