[发明专利]一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，尤其是涉及一种一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

目前，临床上对戊型肝炎病毒IgM抗体的诊断主要采用酶联免疫法（ELISA）、放免法（RIA）和化学发光法等。最普及的方法仍是酶联免疫法（ELISA）。放免法（RIA）因其标记物有效期短和有放射性污染物而被市场逐步淘汰。化学发光法（CLIA），它是在化学发光反应的基础上与免疫反应相结合建立的新技术，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏性。采用化学发光测量仪，具有灵敏度高、稳定性好、快速、准确和简便等优点，无放射性污染，但所用试剂和自动化分析仪均为国外产品，价格昂贵尚难全面普及；EIA法，须经孵育、洗涤、显色、判读等步骤，过程较为繁琐，检测时间长。

戊型肝炎病毒(HEV)感染的诊断主要依赖于抗HEV IgG及IgM的检测，单独检测一项指标用于戊肝诊断均存在一定的局限性，易发生漏检现象。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种漏检率低的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸及其制备方法。 

   本发明的目的之一是提供一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，所述试纸包括样品垫、金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板；

所述硝酸纤维素膜在所述底板的中部，在所述硝酸纤维素膜沿底板的一端依次为金标抗原结合垫、样品垫，在所述硝酸纤维素膜沿底板的另一端为吸水垫，且每相邻两者之间部分叠合；

所述硝酸纤维素膜包含包被有抗人IgM抗体及包被有抗人IgG抗体的检测区和包被有抗兔IgG抗体的质控区；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫一端为质控区，另一端为检测区；所述检测区设有检测线(T1、T2线)，所述质控区设有质控线（C线）；

所述的金标抗原结合垫2上包被有胶体金标记的HEV抗原及胶体金标记的兔IgG抗体或乳胶标记的HEV抗原及乳胶标记的兔IgG抗体或胶体硒标记的HEV抗原及胶体硒标记的兔IgG抗体。

优选，样品垫为亲水性微孔结构材料。

优选，所述亲水性微孔结构材料为无纺布或玻璃纤维。

优选，质控区设有一个质控线（C线）。

优选，所述抗人IgM的宿主为：鼠、羊、兔、鸡、马等；抗人IgG的宿主为：鼠、羊、兔、鸡、马等；抗兔IgG抗体的宿主为：鼠、羊、兔、鸡、马等；HEV抗原为：基因工程重组抗原或天然培养抗原。

优选，所述硝酸纤维素膜上包被有抗人IgM抗体及包被有抗人IgG抗体的检测区的检测区在包被有抗IgG抗体的质控区的下方。

优选，所述试纸宽度为2mm-6mm。

本发明的另一发明目的是提供一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：

a)准备样品垫、吸水垫；

   b)准备金标抗原结合垫

 1）HEV金标抗原： 用碱性溶液将胶体金溶液pH调至至7.0-10.0，混合HEV 抗原与胶体金溶液，然后加入蛋白保护剂，再采用高速冷冻离心的方法对所得金标抗原进行纯化，并用胶体金悬浮液进行复溶得到HEV金标抗原；

2）兔IgG金标抗体：用碱性溶液将胶体金溶液pH调至至7.0-10.0，混合兔IgG与胶体金溶液，然后加入蛋白保护剂，再采用高速冷冻离心的方法对所得金标抗原进行纯化，并用胶体金悬浮液进行复溶得到兔IgG金标抗体；

   3）将所得HEV金标抗原及兔IgG金标抗体按一定比例混合后喷点到金标抗原结合垫上，干燥后即为金标抗原结合垫；

c）准备硝酸纤维素膜

在硝酸纤维素膜辅料的一侧喷点抗人IgM抗体作为T1检测线，中间喷点抗人IgG抗体作为T2检测线，另一侧喷点抗IgG抗体作为质控线（C线）；

d）顺次将所述样品垫、金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相互搭接在底板上，并用切刀机切割成所需宽度的试纸条。

优选，所述胶体金溶液的制备方法为:将100ml 0.01%的HAuCl₄水溶液加热至沸腾，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-10ml的柠檬酸三纳溶液，保持沸腾状态反应3-30min后停止加热，然后冷却。