[发明专利]一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，所述试纸包括样品垫(1)、金标抗原结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)和底板(5)；

所述硝酸纤维素膜(3)在所述底板（5）的中部，在所述硝酸纤维素膜(3)沿底板的一端依次为金标抗原结合垫（2）、样品垫（1），在所述硝酸纤维素膜(3)沿底板的另一端为吸水垫（4），且每相邻两者之间部分叠合；

所述硝酸纤维素膜（3）包含包被有抗人IgM抗体及包被有抗人IgG抗体的检测区和包被有抗兔IgG抗体的质控区；所述硝酸纤维素膜（3）靠近吸水垫（4）一端为质控区，另一端为检测区；

所述的金标抗原结合垫（2）上包被有胶体金标记的HEV抗原及胶体金标记的兔IgG抗体或乳胶标记的HEV抗原及乳胶标记的兔IgG抗体或胶体硒标记的HEV抗原及胶体硒标记的兔IgG抗体。

2.如权利要求1所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，样品垫为亲水性微孔结构材料。

3.如权利要求2所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，所述亲水性微孔结构材料为无纺布、聚酯纤维或玻璃纤维。

4.如权利要求1所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，质控区设有一个质控线(C线)。

5.如权利要求1所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，所述其特征在于，抗人IgM的宿主为鼠、羊、兔、鸡或马；抗人IgG的宿主为鼠、羊、兔、鸡或马；抗兔IgG抗体的宿主为鼠、羊、兔、鸡或马；HEV抗原为基因工程重组抗原或天然培养抗原。

6.如权利要求1所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于硝酸纤维素膜上包被有抗人IgM抗体及包被有抗人IgG抗体的检测区的检测区在包被有抗IgG抗体的质控区的下方。

7.如权利要求1所述的检测人HEV IgM及IgG的免疫层析试纸，其特征在于，试纸宽度为2mm-6mm。

8.一种权利要求1所述试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

   a)准备样品垫、吸水垫；

   b)准备金标抗原结合垫；

1）HEV金标抗原： 用碱性溶液将胶体金溶液pH调至至7.0-10.0，混合HEV 抗原与胶体金溶液，然后加入蛋白保护剂，再采用高速冷冻离心的方法对所得金标抗原进行纯化，并用胶体金悬浮液进行复溶得到HEV金标抗原；

2）兔IgG金标抗体：用碱性溶液将胶体金溶液pH调至至7.0-10.0，混合兔IgG与胶体金溶液，然后加入蛋白保护剂，再采用高速冷冻离心的方法对所得金标抗原进行纯化，并用胶体金悬浮液进行复溶得到兔IgG金标抗体；

3）将所得HEV金标抗原及兔IgG金标抗体按一定比例混合后喷点到金标抗原结合垫上，干燥后即为金标抗原结合垫；

c）准备硝酸纤维素膜

在硝酸纤维素膜辅料的一侧喷点抗人IgM抗体作为T1检测线，中间喷点抗人IgG抗体作为T2检测线，另一侧喷点抗兔IgG抗体作为质控线(C线)；

d）顺次将所述样品垫、金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相互搭接在底板上，并用切刀机切割成所需宽度的试纸条。

9.一种权利要求1所述试纸的制备方法，其特征在于，所述胶体金溶液的制备方法为:将100ml 0.01%的HAuCl₄水溶液加热至沸腾，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-10ml的柠檬酸三纳溶液，保持沸腾状态反应3-30min后停止加热，然后冷却。

10.一种权利要求1所述试纸在血液样本中的应用。