[发明专利]余甘子多糖的制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及余甘子多糖的制备和应用，尤其涉及一种具有抗消化道肿瘤活性的潮汕余甘子多糖的制备和应用。 

背景技术

余甘子Phyllanthus emblica L．又名山油柑、油甘子、余甘果等，为大戟科叶下珠属植物余甘子的成熟果实。余甘子是潮汕地区的优良种质资源之一，余甘子不仅具有丰富的营养价值，而且具有抗炎抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等多种生物活性。目前研究表明，余甘子的主要活性成分为：多糖类物质，黄酮类化合物，抗坏血酸，SOD酶和多酚类化合物，其生物学功能是多种有效成分协同作用的结果。其中，余甘子多糖（粗多糖）具有清除自由基、抗氧化和抗肿瘤等作用，引起了各国学者的兴趣。 

在多糖的提取、分离、纯化以及结构研究中, 脱色是一个重要环节。目前,脱色主要采用双氧水法和活性炭吸附法，用活性炭脱色的脱色率最低，多糖的含量最高；过氧化氢的脱色率较活性炭的好，但多糖含量较低。目前缺乏一种快速、简单、高效的脱色方法，既保证高的脱色率的同时，确保有高的多糖保留率。 

    同时对余甘子多糖的抗消化道肿瘤活性的研究。 

发明内容

本发明的目的是提供一种余甘子多糖的制备方法，特别是粗余甘子多糖的脱色精制方法，它解决了传统脱色精制中或脱色率低或多糖含量低的缺点。 

本发明是通过以下技术步骤实现的，它是以余甘子为原料，按照以下步骤进行制备： 

（1）余甘子去核，用50～80℃热水浸泡 10～60 min，然后打浆,将浆液加热回流1～5h 后, 热提液趁热过滤；

（2）将所得滤液浓缩至原体积 20～30%, 用 95%食用酒精调至溶液乙醇含量为70～85%, 静置8～15hr, 过滤，沉 淀 依 次 用 适 量 80% 乙醇、无水乙醇洗1～ 3 遍；

（3）沉淀经过滤、冷冻干燥得余甘子粗多糖。

（4）以水为溶剂，将余甘子粗多糖配成 0.2～ 0.8 mg/ml溶液，用柠檬酸调节pH至 3.0～ 4.0，按每100 ml 溶液加入 2.0 ～ 2.5 g不溶性壳聚糖，于水浴中使温度在40 ～ 50 ℃，搅拌 45～60 min脱色，过滤除去残渣。 

（5）将所得滤液浓缩至原体积 20～30%，静置12-24hr, 过滤，沉淀经冷冻干燥得余甘子多糖。 

本发明技术步骤（1）中余甘子与热水的比值为1:5～1:10。 

本发明技术步骤（2）中滤液浓缩可采用常压浓缩，也可采用减压浓缩。 

本发明技术步骤（2）中过滤可采用离心过滤。 

本发明技术步骤（2）或步骤（5）中冷冻温度为-4 ℃～-20 ℃。 

本发明技术步骤（4）中最好将PH调为3.0～4.0。 

本发明技术步骤（4）中搅拌脱色温度为40 ℃～50℃。 

本发明技术步骤（4）中搅拌脱色时间为45 min～60min。 

  

本发明脱色率和多糖保留率的测定方法如下：

1. 脱色率测定方法

配制0.5 mg /ml 余甘子多糖样品溶液，对余甘子粗多糖溶液进行了可见光400～600 nm 扫描，确定其吸收光谱。余甘子粗多糖溶液无最大吸收峰，由余甘子多糖溶液脱色前为橙黄色，根据互补色原理可知，溶液主要吸收蓝色波段( 446～464nm)可见光，故选择450 nm 为检测波长。

取适量的脱色前后待测液在450 nm 处测定吸光度，并按下式（1）计算脱色率: 

   脱色率( %) =  (A _脱色前－A _脱色后)  / A_脱色前× 100%。

    注：A为吸光度。 

 2. 多糖保留率测定方法 

配制0.5 mg /ml 余甘子多糖样品溶液，取脱色前后待测液各2.00 ml，加质量分数为 6% 的重蒸苯酚 1.0 ml 及浓硫酸 5.0 ml, 迅速摇匀后，静置 10 min, 沸水水浴加热15min，冷却至室温，于490 nm 波长处测吸收度A 值，以标准曲线计算多糖溶液中的葡萄糖含量和多糖保留率。

     多糖保留率( %) = C×D/W 

式中: W 为余甘子多糖质量( mg) ; C 为多糖溶液中的葡萄糖质量浓度( mg /ml) ; D 为多糖的稀释倍数。

   本发明对抗肿瘤活性具有很好的抑制作用。 

实施例