[发明专利]一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡及其制备方法和使用方法

说明书

技术领域

本发明属于拟除虫菊酯类农药残留检测技术领域，具体涉及一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡及其制备方法和使用方法。

背景技术

拟除虫菊酯类农药(Pyrethriod insecticids)是一类天然仿生杀虫剂，具有灭虫快、毒性低、使用安全等特点。是我国农产品中农药残留检出率较高的药种之一。目前拟除虫菊酯类农药产量占杀虫剂类产量的20％，使用面积约占整个杀虫剂使用面积的25％。由于部分拟除虫菊酯类农药残留期较长，对非目标性生物毒性较大，且具有环境内分泌干扰作用，因此，建立快速检测技术具有十分重要的意义。

目前，实验室用于检测拟除虫菊酯的方法多为色谱方法或毛细管电泳方法，这类方法检测的周期长、成本高、操作不简便，样本制备复杂，几乎都是侧重于终端检测，即使获得检测结果后，可能大批的检测材料已经流向市场或者消费者手中。由于监管分散、样本分散，实验室方法难以及时快速、全面地从源头和现场进行检测。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为失踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂如白磷、抗坏血酸、柠檬酸钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称胶体金。胶体金在弱碱性环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应，其实质是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。根据胶体金的一些物理性状，如高电子云密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。已有的免疫学检测方法由于没有较好的宽谱抗体，检测的灵敏度和稳定性不高，难以满足现场快速检测的需要。利用宽谱抗体建立免疫胶体金速测卡是目前农药残留检测领域的一个重要的发展方向。

目前，将现有的免疫胶体金技术应用到检测农药残留，仍然存在许多问题，如，特异性差，稳定性差，灵敏度不高，成本高，操作不简便，因此本领域技术人员亟需对现有免疫金技术进行改进，研制特异性强、灵敏度高、稳定性好、重复性好的检测多种拟除虫菊酯类农药的新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡及其制备方法和使用方法，克服了现有技术难以实现现场快速检测农产品、水环境及土壤中拟除虫菊酯类农药残留的难题，可用于拟除虫菊酯类农药的现场快速检测盒筛查。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，所述试纸条包括底板、粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫；所述卡壳上开有加样孔和观察窗；所述加样孔设于对应所述样品垫上方壳体，所述观察窗设于对应所述反应膜上方壳体，所述反应膜上设有检测线和质控线，所述金标垫上包被拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体，在反应膜的检测线上包被拟除虫菊酯类农药宽谱抗体，反应膜的质控线上包被羊抗兔二抗，其中，所述拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体为将拟除虫菊酯类农药宽谱抗体偶联到20～25nm氯金酸胶体颗粒表面所得。

进一步，所述样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫之间设有1～2mm的重叠区；所述检测线和质控线间隔0.5～1.0cm。

所述底板为PVC板，所述反应膜为硝酸纤维素膜。所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水纸由滤纸制成。

又，所述拟除虫菊酯类农药宽谱抗体为拟除虫菊酯类农药宽谱多克隆抗体。

所述拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体的标金量是14～16μg/mL，金标垫上包被的拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体的浓度为14～16μg/mL。

本发明拟除虫菊酯类农药宽谱抗体偶联到氯金酸胶体颗粒表面所得时，所用氯金酸胶体颗粒溶液的pH值为8.0～8.5。

再，所述反应膜的检测线上包被拟除虫菊酯类农药宽谱抗体的浓度为0.8～1.4mg/mL。

本发明所述拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡的制备方法，包括如下步骤：

1)将样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫依次粘贴在底板上制成试纸条；