[发明专利]一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，所述试纸条包括底板、粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫；所述卡壳上开有加样孔和观察窗；所述加样孔设于对应所述样品垫上方壳体，所述观察窗设于对应所述反应膜上方壳体，所述反应膜上设有检测线和质控线，其特征在于，所述金标垫上包被拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体，在反应膜的检测线上包被拟除虫菊酯类农药宽谱抗体，反应膜的质控线上包被羊抗兔二抗，其中，所述拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体为将拟除虫菊酯类农药宽谱抗体偶联到20～25nm氯金酸胶体颗粒表面所得。

2.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，所述底板为PVC板，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水纸由滤纸制成。

3.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，所述样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫之间设有1～2mm的重叠区；所述检测线和质控线间隔0.5～1.0cm。

4.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，所述拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体的标金量是14～16μg/mL，金标垫上包被的拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体的浓度为14～16μg/mL。

5.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，拟除虫菊酯类农药宽谱抗体偶联到氯金酸胶体颗粒表面时，所用氯金酸胶体颗粒溶液的pH值为8.0～8.5。

6.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，所述反应膜的检测线上包被拟除虫菊酯类农药宽谱抗体的浓度为0.8～1.4mg/mL。

7.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡，其特征在于，所述拟除虫菊酯类农药宽谱抗体为拟除虫菊酯类农药宽谱多克隆抗体。

8.如权利要求1～7任一项所述拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡的制备方法，包括如下步骤：

1)将样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫依次粘贴在底板上制成试纸条；

2)将拟除虫菊酯类农药宽谱抗体用20～25nm氯金酸胶体颗粒包被，制得蛋白浓度为14～16μg/mL的拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体，喷涂于金标垫上，干燥；再将蛋白浓度为0.8～1.4μg/mL的拟除虫菊酯类农药宽谱抗体喷涂于反应膜上的检测线位置，36～37℃干燥；然后将羊抗兔二抗喷涂于反应膜上的质控线位置，干燥后将试纸条装到卡壳内制备成速测卡。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中拟除虫菊酯类农药宽谱抗体用纳米金颗粒包被的具体方法是：取20～25nm氯金酸胶体颗粒溶液至小试管中，离心，除去上清液，用等体积超纯水悬浮，调节pH值为8.0～8.5，随后将拟除虫菊酯类农药宽谱抗体缓缓滴入纳米金颗粒悬液，室温震荡，再滴加BSA，使BSA的终浓度为0.1％，室温震荡，以封闭纳米金颗粒上为结合的位点，避免非特异性吸附；离心，除去多余的拟除虫菊酯类农药宽谱抗体和BSA，超纯水悬浮，洗涤，完成纳米金颗粒与拟除虫菊酯类农药宽谱抗体的偶联，得到拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体，其中，标金量是14～16μg/mL。

10.如权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药胶体金免疫层析速测卡的使用方法，包括如下步骤：

1)待测样品的前处理：若待测样品为液体物质时，可直接取待测样品检测；若待测样品为固体物质时，将待测样品磨碎，加入样品处理液，静置后检测；其中，所述样品处理液为磷酸盐缓冲液；

2)检测：将所取样品滴入加样孔内，样品在毛细作用下沿着样品垫迁移，室温作用5～10min，观察结果；

3)结果判断：

阳性：质控线、检测线均呈现红色条带，说明样品中有拟除虫菊酯类农药存在；

阴性：质控线呈现红色条带，检测线不呈现红色条带，说明样品中没有拟除虫菊酯类农药存在；

失效：质控线、检测线均不呈现红色条带或仅有检测线呈现红色条带，说明试纸条失效。