[发明专利]富血小板血浆的提取方法和提取的富血小板血浆

说明书

本申请是2012年7月30日提交的中国专利申请号201210267055X，发明名称为“富血小板血浆的提取方法和提取的富血小板血浆”案的分案申请，其全部内容引入本文作为参考。 

技术领域

本发明属临床医学技术领域，具体涉及一种提取富含血小板的血浆的方法，本发明方法在特定条件下获得的富血小板血浆具有血小板浓度高、血小板回收率高等至少一个方面的优点。 

背景技术

富含血小板的血浆，在本发明中可称为富血小板血浆(Platelet Rich Plasma，PRP)，其是是通过离心血液而得到的含高浓度的血小板血浆。人体的血小板除了可以在止血的时候提供凝聚作用外，血小板中还含有很多与创伤愈合和骨头再生有关的多种生长因子。如血小板衍生生长因子(Platelet Derived Growth Factor，PDGF)，转化生长因子(Transforming Growth Factor，TGF)，胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factor，IGF)，表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)以及血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)等等，血小板来源的生长因子，对细胞的分化和增殖起着促进作用，这些生长因子相互之间具有协同响应，与其他促进细胞活性的因子相互作用和影响，共同维持着组织环境的平衡，对伤口愈合、修复和再生有着重要的作用。 

另外，由于PRP可以从患者自身血液中提取，经提取富集处理后，可用于相关疾病的治疗，因而来源丰富，取材方便，制备方法简单而且可以让身体吸收。自身PRP使用能避免病毒传播和免疫排斥的问题出现。因此PRP被广泛应用到不同的医学领域中。如骨科、口腔科、颌面外科、运动医学以及美容医学。 

PRP在目前为止还没有一个统一的制备方法，PRP的制备原理主要是利用血液中各种成分沉降速度不同，通过离心将血液分层。从而获取含血小板的血浆，并利用离心原理进一步的浓缩以获得高浓度的血小板血浆。人体全血中血小板的浓度一般为1～3×10⁵/ml。研究认为浓缩后的PRP血小板浓度应为全血血小板浓度的3-4倍。研究也发现PRP中血小板浓度的提高能有效提高干细胞的增殖和分化能力以及能够显著增加成纤维细胞的增殖和I型胶原蛋白的表达。 

因此有效的分离和提高PRP中血小板的浓度成为了整个PRP治疗方案的关键。 

林庶茹等(CN101402940A，中国专利申请号：200810228726.5，发明名称：一种小鼠血小板的提取方法)公开了一种小鼠血小板的提取方法，小鼠眶静脉取血，置于抗凝离心管中，静置30MIN后离心，800RPM离心10MIN，上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试 管中，3500RPM离心10MIN，弃去上清液，管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50～100ΜL质量浓度为1％草酸铵溶液，以玻璃棒轻轻搅拌，再加入质量浓度为1％草酸铵溶液2～3ML，静置5MIN，使红细胞溶解。3500RPM离心10MIN，弃去上清，加入血小板洗涤液并反复吹打，使成为血小板混悬液，3300RPM离心10MIN，弃去上清，加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。该血小板将作为抗原免疫豚鼠后，取豚鼠血清给小鼠注射，制备过敏性紫癜模型。此方法操作简单，可以得到高浓度的血小板，并很好地解决血小板纯度不佳的问题。这种针对小鼠血液进行血小板富集的方法虽然据信可以获得浓度达10¹⁰的血小板，然而该方法未公开其血小板的收率，并且方法在操作上比较繁杂，难以适用于人血的处理。 

此外，王悦等(CN 102078644 A，中国专利申请号201110053979.5，发明名称：一种简便高效的自体富血小板血浆提取装置及提取方法)中公开了一种简便高效的自体富血小板血浆提取装置及提取方法,所提取的自体富血小板血浆中含有多种复合生长因子,能够有效地促进组织的修复。由1个注射器、1个静脉输液器连接管、1个静脉留置针塑料卡片和1个静脉输液器针头组成；注射器用以抽取静脉血并充当离心管；静脉输液器针头通过静脉输液器连接管和注射器出口连接,静脉输液器针头用以皮肤血管穿刺、抽取抗凝剂和激活剂并向人体需要部位注射提取后的自体富血小板血浆；静脉输液器连接管可弯曲固定于静脉留置针塑料卡片中。据信这种装置在提升血小板提取的操作性方面是有益的。 

因此为了从血液中富集血小板而得到有临床治疗意义的富血小板血浆，探寻一种操作过程简单、收率高、富集的血浆中血小板浓度高的方法，是本领域技术人员迫切期待的。