[发明专利]一种非洲猪瘟抗原及其制备的荧光纳米晶试纸条在审
申请号: | 201410554936.9 | 申请日: | 2014-10-17 |
公开(公告)号: | CN104267181A | 公开(公告)日: | 2015-01-07 |
发明(设计)人: | 吕建强;花群义;杨俊兴;张彩虹;曹琛福;孙洁;刘建利;陶虹;宗卉;廖立珊;唐金明;曾少灵;阮周曦;黄超华 | 申请(专利权)人: | 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/533 |
代理公司: | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人: | 刘杉 |
地址: | 518045 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 非洲 猪瘟 抗原 及其 制备 荧光 纳米 试纸 | ||
1.一种非洲猪瘟病毒重组抗原的制备方法,包括以下步骤:
a)人工设计并合成该抗原表位的重组基因序列,所述如序列表SeqIDNo.1所示;
b)将该序列克隆至载体中,用PCR方法扩增该片段;
c)将步骤b)获得的PCR产物,并与线性载体连接,构建重组表达载体;
d)将重组表达载体导入原核表达体系,诱导蛋白表达;
e)对表达产物进行纯化后获得所述非洲猪瘟的重组抗原。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒重组抗原,其特征在于:步骤d)中,诱导剂及浓度为IPTG1.0mmol/L,诱导时间为3h。
3.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒重组抗原,其特征在于:步骤b)中,用于所述重组基因序列特异性扩增的PCR引物为:
P1:TAGATCCATGGCTTCTGGTGGCGCGTT
P2:ATTCTCGAGGTCGACTTAGTGATGG。
4.权利要求1所述的非洲猪瘟病毒重组抗原,在制备用于检测非洲猪瘟病毒抗体的试剂中的应用。
5.一种非洲猪瘟抗体检测荧光纳米晶试纸条,包括:依次连接并固定于PVC衬板上的样品垫、荧光纳米晶标记物释放垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫;所述硝酸纤维膜包被有权利要求1所述非洲猪瘟病毒抗原作为检测线和兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体作为质控线。
6.根据权利要求5所述的非洲猪瘟抗体检测荧光纳米晶试纸条,其特征在于:所述标记结合物释放垫为喷有标记物的玻璃纤维膜,所述标记物为金黄色葡萄球菌A蛋白标记荧光纳米晶。
7.根据权利要求5所述的非洲猪瘟抗体检测荧光纳米晶试纸条,其特征在于: 所述硝酸纤维素膜上的检测线位于靠近所述标记物释放垫的一端,所述硝酸纤维素膜上的质控线位于靠近所述吸水垫的一端,所述质控线与所述检测线的垂直距离为4mm~7mm。
8.根据权利要求5所述的非洲猪瘟抗体检测荧光纳米晶试纸条,其特征在于:所述非洲猪瘟病毒抗原包被浓度为1.5mg/mL,所述兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体包被浓度为1.5mg/mL。
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