[发明专利]鲢鱼DPP-IV抑制多肽及其应用

权利要求书

1.一种具有DPP-Ⅳ抑制活性的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，其由以下方法制备：鲢鱼鱼肉蛋白经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解后制得的酶解物，经脱盐，即得；

所述经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解包括以下步骤：

1)第一步酶解反应，胃蛋白酶：pH2.0、底物浓度5.0％、温度37℃、酶与底物比1％、水解时间为1h；

2)第二步酶解反应：将胃蛋白酶酶解物用下面的方法继续酶解胰酶：pH7.5、温度37℃、酶与底物比2％、水解时间为2h；

3)第三步酶解反应：将胰酶酶解物用下面的方法继续酶解：中性蛋白酶：pH7.5、温度45℃、酶与底物比3％、水解时间为6h；

4)灭活除杂：将中性蛋白酶酶解后的水解液经沸水浴10min灭活最终水解液中的蛋白酶后，迅速冷却，酶解物离心，取上清。

2.根据权利要求1所述的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，所述鲢鱼鱼肉蛋白由以下方法制备：以鲢鱼为原料，经去鳞、去内脏，洗净，选取鲢鱼背部白肉，切成小块后用搅碎机搅成肉糜，再经灭除鱼肉内源性蛋白酶得到的。

3.根据权利要求2所述的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，所述鲢鱼鱼肉蛋白由以下方法制备：将鲢鱼杀死后，去鳞、去内脏，洗净后进行采肉，选取鲢鱼背部白肉，切成小块后用搅碎机搅成肉糜，然后鲢鱼肉糜与去离子水混合，调整蛋白质浓度为5％，将调整好蛋白质浓度的鱼肉浑浊液在95℃水浴锅内放置10min灭酶，冷却后进行均质处理，即得鲢鱼鱼肉蛋白。

4.根据权利要求1所述的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，所述脱盐是指将三段式酶解得到的上清液通过离子交换树脂进行脱盐。

5.根据权利要求4所述的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，所述脱盐方法包括以下步骤：将三段式酶解得到的上清液以1-2BV/h流速通过离子交换树脂，收集流出液。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的淡水鱼鲢鱼多肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)将鲢鱼杀死后，去鳞、去内脏，洗净后进行采肉，选取鲢鱼背部白肉，切成小块后用搅碎机搅成肉糜，然后鲢鱼肉糜与去离子水混合，调整蛋白质浓度为5％，将调整好蛋白质浓度的鱼肉浑浊液在95℃水浴锅内放置10min灭酶，冷却后进行均质处理，即得鲢鱼鱼肉蛋白；

2)第一步酶解反应，胃蛋白酶：pH2.0、底物浓度5.0％、温度37℃、酶与底物比1％、水解时间为1h；

3)第二步酶解反应：将胃蛋白酶酶解物用下面的方法继续酶解胰酶：pH7.5、温度37℃、酶与底物比2％、水解时间为2h；

4)第三步酶解反应：将胰酶酶解物用下面的方法继续酶解：中性蛋白酶：pH7.5、温度45℃、酶与底物比3％、水解时间为6h；

5)灭活除杂：将中性蛋白酶酶解后的水解液经沸水浴10min灭活中最终水解液中的蛋白酶后，迅速冷却，酶解物离心，取上清；

6)脱盐：指将三段式酶解得到的上清液通过离子交换树脂进行脱盐，以一定流速通过离子交换树脂，收集流出液，浓缩，即得。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤4)中离心的速度和时间分别为1500-2500×g，10-20min。

8.权利要求1-5任一项所述的DPP-Ⅳ抑制多肽粉在制备预防或辅助治疗受益于DPP-IV抑制的疾病的药物或食品中的应用。