[发明专利]人脂肪间充质干细胞制备方法及其在制备疾病药物的应用

权利要求书

1.一种人脂肪间充质干细胞的制备方法，其特征在于：它包括如下具体步骤：

(1)脂肪的采集：经供体筛选合格后吸脂或手术切除方式无菌采集脂肪标本10ml以上；

(2)脂肪的运输：将脂肪置于保存液中，2-8℃恒温保存于疫苗箱中，48h内送至实验室；

(3)脂肪的交接：实验室接收脂肪，登记好客户信息，并进行编码；

(4)制备脂肪微块：洗涤脂肪，去除残留的血液，将脂肪绞碎为0.5-1mm3的脂肪微块；

(5)SVF提取：0.1％胶原酶I消化脂肪微块，离心弃去上层，100um滤网过滤，获得SVF；

(6)原代培养：按照1×105个/ml接种，置于(37±0.5)℃，(5±0.2)％浓度C02条件，培养基为人间充质干细胞无血清完全培养基；

(7)传代培养：原代培养经7d左右，细胞融合达70％～80％时，胰酶消化收集P0代细胞，按照5000～6000个/cm2的密度传P1，经3d，P1代融合达80％～90％时，同上，传P2，以此类推传至P3、P4......；

(8)细胞冻存及建立细胞库：将上述获得的每批次人脂肪间充质干细胞进行无菌、支原体、内毒素、核型分析、流式表面标记等检测，检测合格的人脂肪间充质干细胞按照供体来源、细胞编码、细胞数量、细胞代数及冻存日期等进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，建立细胞库；

(9)细胞复苏：将人脂肪间充质干细胞冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，不断摇动，2min中之内解冻，离心洗涤弃上清，获得人脂肪间充质干细胞，按照需求使用即可。

2.根据权利要求1所述的人脂肪间充质干细胞在制备疾病药物中的应用，其特征在于：特别是在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用，其中自身免疫性疾病是指系统性红斑狼疮、多发性硬化、1型糖尿病、类风湿性关节炎。