[发明专利]鉴定育发化妆品中人参和甘草类功效成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化妆品分析领域，特别是涉及一种鉴定育发化妆品中人参和甘草类功效成分的方法。 

背景技术

人参和甘草是常见的中草药植物，现有许多研究证明，在皮肤护理领域中人参和甘草提取物除了具有极佳美白等功效外，也表现出较好的育发功效。多项中医临床治疗采用人参、甘草等多种中草药制成酊剂外用，对脂溢性脱发等有显著效果；赵玉磊(赵玉磊.黄芪、女贞子、人参等中药促毛发生长的在体研究及其对化疗后脱发的影响。南京:南京医科大学,2003.硕士学位论文)和Park等(Soojin Park,Weon-Sun Shin,Jinnyoung Ho.Journal of Ethnopharmacology,2011,138:340-344)均通过C57BL/6小鼠模型的毛囊细胞试验证明人参等中药能明显减少退行期毛囊内细胞凋亡，诱导和延长毛发的生长期；朱海琴等(黄芩苷、齐墩果酸及甘草提取物等中药成分对人毛囊和毛乳头细胞生物学特性的影响。南京:南京医科大学,2007.硕士学位论文)研究认为甘草提取物能增强毛乳头细胞分泌VEGF从而可能起到促毛发生长作用。随着对人参、甘草提取物育发功效研究的深入，其在育发化妆品中的应用日益广泛。然而，相关检测方法却较为缺失，而对于市售人参和甘草提取物类育发化妆品的质量监管也处于空白，导致假冒伪劣、虚假宣传等不良现象严重泛滥。因此，亟需建立相应的对育发化妆品中人参和甘草类功效成分进行鉴定的检测方法。 

而目前，关于人参和甘草类功效成分的检测研究主要是针对中药材植物和药物产品等，对人参和甘草提取物中特定的功效标识成分(如：Ginsenoside Rg1、Ginsenoside Rb1、Ginsenoside Re，glycyrrhetic acid和Glabridin，其具体结构式分别为下述式Ⅰ-式Ⅴ)进行定性或定量检测研究，检测方法以高效液相色谱法(HPLC-DAD)和高效液相色谱-质谱联用法为主。其中，由于人参皂甙类化合 物的紫外吸收为末端吸收，故常用的高效液相色谱-紫外检测法在分析育发化妆品等基质较为复杂的样品时，往往无法取得满意的方法灵敏度和选择性。 

发明内容

基于此，本发明以三种人参皂甙(Rg1、Rb1、Re)和两种甘草功效成分(甘草次酸和光甘草定)为检测对象，主要采用固相萃取技术对基质复杂的育发化妆品，特别是含高表面活性剂和油脂的育发化妆品进行有效净化，并结合超高 效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱技术，建立一种鉴定育发化妆品中人参和甘草类功效成分的方法。 

解决上述技术问题的具体技术方案如下： 

一种鉴定育发化妆品中人参和甘草类功效成分的方法，包括以下步骤： 

(1)预处理：准确称取样品0.5-1.0g，用甲醇溶解，定容至10ml，离心，取上清液，按体积比2-2.5:7.5-8加水稀释，得A液； 

(2)固相萃取：取500mg/6mL的MAX固相萃取柱，依次用甲醇、水进行活化平衡，将A液通过MAX固相萃取柱，后用体积分数为4.5-5.5％的氨水溶液淋洗，再用体积比为75-77:23-25的甲醇-水溶液洗脱(洗脱人参皂甙Rg1、Rb1、Re)，得洗脱液B，甲醇淋洗(去除高脂溶性杂质)，后用体积分数为1.8-2.2％的甲酸甲醇溶液洗脱，得洗脱液C，分别将洗脱液B和洗脱液C用氮吹至小于1ml，甲醇复溶，过滤，得B液和C液； 

(3)检测：分别将B液和C液用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法进行测定，条件如下： 

色谱条件： 

色谱柱：HSS T3，规格为2.1×100mm,1.8μm； 

进样量：4-6μL； 

流速：0.25-0.35mL/min； 

流动相A：体积分数为0.0015-0.0025％甲酸水溶液，流动相B：甲醇；梯度洗脱：0-2min，40％-60％B，2-5min，60％-100％B，保持1min，6-8min，100％-40％B； 

质谱条件： 

离子源：电喷雾离子源，负离子模式； 

毛细管电压：2.4-2.6KV； 

锥孔电压：48-52V； 

脱溶剂气温度：445-455℃；离子源温度：95-105℃；脱溶剂气流速：550-650L/h；锥孔气流速：48-52L/h；四极杆采集质量数范围：100-1000u。 

在其中一些实施例中，步骤(2)中所述的甲醇-水溶液中甲醇和水的体积比为75:25。