[发明专利]胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物传感器识别元件快速测定BOD的方法

权利要求书

1.一种以胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物识别元件快速测定BOD的方法，其特征在于，该方法包括选择胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物识别元件、制备胶原纤维固定化大肠杆菌生物识别元件的工艺和利用胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物识别元件对BOD的快速测定，以及该固定化大肠杆菌的保存方法和该微生物识别元件的活化方法。

2.权力要求1所述以胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物识别元件快速测定BOD的方法，其特征在于，所述的微生物固定化载体为金属离子锆(Zr)改性后的胶原纤维（ZICF）。

3.权利要求1所述以胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物识别元件快速测定BOD的方法，其特征在于，所述的固定化微生物种类为大肠杆菌(大肠埃希氏菌；Escherichia coli )。

4.权利要求1所述胶原纤维固定化大肠杆菌的制备：称取干重0.5g ZICF置于无菌水中浸泡5-12h；大肠杆菌在营养肉汤培养基中活化培养18-24h，经离心、无菌生理盐水清洗后收集细胞于无菌生理盐水中制得菌悬液，并调节菌悬液浓度为10⁷-10¹⁰cfu/mL；将ZICF过滤后加入上述菌悬液中，37℃震荡吸附5h后用无菌生理盐水清洗至无游离菌检出，即得胶原纤维固定化大肠杆菌。

5.权利要求1所述胶原纤维固定化大肠杆菌生物识别元件的制备：每次称量湿重为0.10-0.30g的胶原纤维固定化大肠杆菌，将固定化大肠杆菌置于两层200目尼龙网之间，使之形成一层固定化微生物膜，使用时将该膜紧贴于溶解氧电极头前的半透膜上。

6.权利要求1所述利用胶原纤维固定化大肠杆菌作为生物敏感膜对BOD的快速测定：测量时，将附有固定化大肠杆菌的溶解氧电极头置于盛有0.07mol/L 磷酸氢二钠、磷酸二氢钾缓冲液(PBS缓冲液)的测量杯中，通过微量曝气管以24L/h的曝气强度对缓冲液进行曝气，测量温度为37℃、pH为7，待溶解氧（DO）值稳定后加入含有机物的样品溶液，固定化微生物分解有机物导致水中DO值下降到另一个稳定值，求得前后两次DO值之差，通过标准曲线计算所测水样的BOD值。

7.权利要求1所述的胶原纤维固定化大肠杆菌的保存方法，其特征在于，胶原纤维固定化大肠杆菌的保存条件为：0.07mol/L PBS缓冲液，pH=6-7，温度4℃。

8.权利要求1所述的胶原纤维固定化大肠杆菌的活化方法，其特征在于，胶原纤维固定化大肠杆菌的活化方法为：将存于4 ℃条件下的固定化大肠杆菌在36-37 ℃条件下于原溶液中放置24h；组成BOD传感器后对浓度为50-200 mg/L的葡萄糖谷氨酸（GGA）溶液多次测定次，DO下降值连续5次相对偏差小于5%，即完成固定化大肠杆菌的活化。