[发明专利]人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用，属于生物医学领域。

背景技术

热休克蛋白gp96，即GRP94(glucose-regulated protein 94)，是存在于真核生物细胞内质网中分子量约为96kDa的热休克蛋白。它属于HSP90家族，是胞质HSP90的旁系同源蛋白，约占细胞总蛋白的1％。在正常的生理条件下，gp96定位于细胞内质网中，也存在细胞的质膜上。gp96N端的21个疏水性氨基酸的信号肽介导gp96分子进入内质网，在内质网中在蛋白酶的作用下将信号肽被切除，gp96分子通过C端的KDEL序列与内质网膜上的KDEL受体相互作用使gp96分子滞留于内质网中，在内质网中被加工。gp96在进化过程中是高度保守，成熟的gp96蛋白由四个结构域组成：N端结构域，含有ATP结合区及结合抗原肽的区域；带电铰链区，是gp96发挥活性必需的，具有调节gp96构象的改变，带电铰链区又可以分为E/D-密集序列和多聚赖氨酸重复序列，E/D-密集序列含有1-2个钙离子结合位点；中间结构域，含有参与蛋白-蛋白互作用的亮氨酸拉链区和KEKE区；C端结构域，含有二聚体区，还有与内质网上受体结合的KEDL序列。

肝硬化是临床常见的慢性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数由肝炎转变肝硬化，少部分为酒精和血吸虫导致肝硬化。早期肝硬化肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症而死亡。因此，迫切需要找到新的标志物作为早期肝硬化的检测指标。

原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC，简称肝癌)，在全世界范围内发病率排在第六位，每年全世界的发病人数是62.6万，我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。相对于高死亡率，早期肝癌的发现比例却非常低。近年来，虽然针对肝癌的治疗手段不断更新(包括手术切除、肝移植术、放射治疗、介入治疗、微创消融治疗等)，但肝癌治疗的总体疗效并无明显提高，复发和转移仍然是影响肝癌预后的最主要因素。目前肝硬化、肝癌的检测主要通过影像学、组织活检等，血清学检测的灵敏度和特异性不高，多数患者一旦确诊即为肝硬化或肝癌的晚期，失去了最佳的治疗时期。因此，急需挖掘对肝硬化、肝癌早期筛查的分子标志物和简便易行的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用。

本发明提供检测人热休克蛋白gp96含量的物质在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用；

所述人热休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

上述应用中，所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质包含人热休克蛋白gp96和/或人热休克蛋白gp96的抗体；

所述人热休克蛋白gp96的抗体具体为人热休克蛋白gp96的单克隆抗体、人热休克蛋白gp96的多克隆抗体或人热休克蛋白gp96的基因工程抗体。

上述任一所述的应用中，所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质还包含通过酶联免疫吸附法测定人热休克蛋白gp96含量所需的试剂中除人热休克蛋白gp96和人热休克蛋白gp96的抗体之外的试剂和所需的仪器。

上述任一所述的应用中，所述酶联免疫吸附测定法为ELISA双抗体夹心法；

所述ELISA双抗体夹心法中人热休克蛋白gp96的抗体具体为人热休克蛋白gp96的单链抗体和/或人热休克蛋白gp96的多克隆抗体和/或标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗；

所述标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗具体为酶标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗；

所述酶标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗的酶可以催化底物显色；

所述人热休克蛋白gp96的单链抗体具体为gp96-scFv-comp抗体，该抗体的序列如SEQ ID No.1所示，该抗体能特异性结合人热休克蛋白gp96的N端；

所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体具体的商品名称为山羊多克隆抗体，该抗体购自Santa Cruz Biotech，产品目录号为SC-1794，该抗体特异性结合于人热休克蛋白gp96的C端；