[发明专利]一种高效的肿瘤个体化免疫治疗方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进临床应用自体gp96蛋白个体化治疗肿瘤疗效的方法及其应用。 

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的常见病，已成为全球一个主要死亡原因，在2012年造成820万人死亡，全球癌症带来的经济损失高达8950亿美元。由于癌症的发生是一个逐步积累的过程，发病率与死亡率随着年龄的增大呈现指数上升的趋势。而我国随着国民经济的发展、医疗卫生的进步和预期寿命的延长，人口分布已进入老龄化阶段，且主要人口年龄分布仍在逐年增大，老龄化日趋严重。同时环境污染依然严重。我国肿瘤发病率呈一个快速增大的态势。恶性肿瘤已成为我国疾病死亡的第一杀手。近几年来国内每年新增肿瘤病人220万人，死亡约160万人，目前全国肿瘤患者总数估计在450万人左右。我国居民每死亡的5人中，即有1人死于癌症。肿瘤病因复杂，治疗费用高昂，我国每年用于恶性肿瘤的医疗费用高达1200多亿元。由于治疗缺乏有效性，我国肿瘤患者5年生存率不足25％，京津沪这样的大城市也仅为40％。 

应用自体肿瘤组织提取的gp96多肽复合物作为个体化治疗性疫苗免疫治疗肿瘤，充分考虑到个体间的差异，可以达到最佳治疗效果，是当今医学及药物学发展的重要方向之一。 

gp96蛋白存在于细胞内质网膜内，是热休克蛋白家族成员之一。gp96作为分子伴侣在蛋白折叠与运输过程中发挥重要作用；同时它能结合细胞中5-25个氨基酸的抗原多肽，从肿瘤组织纯化的gp96-多肽复合物是最能代表肿瘤组织的抗原肽库。皮下免疫gp96-多肽复合物后，gp96复合物通过抗原呈递细胞（APC)表面受体分子进入细胞并将结合的抗原表位呈递给MHC I类和II类分子，从而启动患者肿瘤特异性T细胞免疫应答。 

研究表明肿瘤具有个体特异性，肿瘤的特异性不仅表现在肿瘤类型之间，还表现在不同个体之间。即使是同种类型肿瘤，不同个体的肿瘤生物学和免疫学特性也存在显著差别。这使得针对已知肿瘤抗原而设计的肿瘤疫苗不能有效激发针对肿瘤细胞的免疫反应。而肿瘤自体gp96抗原复合物携带了完整的肿瘤个体信息，应用该复合物免疫治疗充分考虑了个体间的差异，并利用gp96天然T细胞佐剂的特性，可以达到最佳治疗效果。 

临床试验已经证明，自体热休克蛋白gp96复合物能够激活肿瘤特异性T细胞，对术后残留的肿瘤细胞，包括休眠肿瘤细胞和肿瘤干细胞进行有效杀伤和清除，可以达到延缓肿瘤复发和延长患者生命的效果。应用热休克蛋白gp96自体疫苗激活肿瘤特异性T 细胞，对于治疗肾癌、黑色素瘤及脑胶质瘤等安全有效，显著延长患者生存期。接受自体gp96治疗的黑色素瘤MIa和Mlb期患者平均存活期比对照治疗延长18.4个月（31.2 vs 12.8月，P = 0.03，危险比HR = 0. 45)。接受gp96自体疫苗治疗的未转移中等风险肾癌患者(包括I/II期，III期的T1/2/3)，复发时间延长45%(P<0.01, 危险比HR = 0.55)，与对照相比复发时间延长约1.8年，同时接受治疗的患者存活期延长。接受治疗的复发性胶质母细胞瘤患者中位生存期延长83%（47.6周 比 26周）。因此该治疗方法已经于2008年在俄罗斯批准上市治疗肾癌，并被美国FDA和欧盟EMA批准作为治疗黑色素瘤、脑胶质母细胞瘤、肾癌的孤儿药。 

调节性T细胞（Treg)是一群具有抑制功能的T细胞亚群，能够在获得性免疫、天然免疫过程中发回抑制作用，主要特征是表达CD4阳性、CD25高表达和Foxp3阳性。有证据表明Treg细胞比例增高或数量增多是肿瘤患者免疫耐受的一个重要机制。有证据表明，去除或者减少Treg细胞能增强机体针对病毒、肿瘤等疾病的免疫反应，或者增加自身免疫病的发生危险。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何在临床水平有效的个体化免疫治疗恶性肿瘤。 

本发明的一个目的是提供一种肿瘤个体化免疫治疗的方法。该方法的一个要点是从患者手术切除的肿瘤组织制备自体gp96-抗原复合物作为个体化疫苗。该方法的另一个要点是在患者免疫时有效抑制调节性T细胞增强个体化疫苗的免疫效果。 

上述的gp96-抗原复合物是将手术切除的肿瘤组织充分研磨破碎，离心获得的上清匀浆液依次进行ConA亲和层析和强阴离子交换层析得到的；上述手术切除的肿瘤组织包括但不限于食管癌组织、肺癌组织、胰腺癌组织、结肠癌组织、直肠癌组织、肝癌组织、肾癌组织、胃癌组织等；上述纯化步骤包括如下步骤：