[发明专利]一种血清 12 型副猪嗜血杆菌疫苗株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及兽医生物制品中副猪嗜血杆菌灭活疫苗领域，特别是涉及一种血清12型副猪嗜血杆菌疫苗株，还涉及该疫苗株在制备灭活疫苗中的应用以及制备灭活疫苗的方法。

背景技术

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)是一种G-球杆菌，是猪的一种条件性病原菌，可引起副猪嗜血杆菌病。该病于1910年由德国学者Glasser首先报道，现已在全世界范围内广泛分布。目前，副猪嗜血杆菌感染是引起猪场仔猪高死亡率的主要病因之一。该病目前给中国猪群带来很大威胁，随着猪繁殖与呼吸综合征(PRRS，蓝耳病)的流行，副猪嗜血杆菌病给猪群造成的损失比以往更为严重。副猪嗜血杆菌只感染猪，具有很强的宿主特异性，可以影响2周龄～4月龄的猪，主要在断奶前后和保育舍阶段发病，发病率一般为10％～15％，严重时死亡率可达50％。

Hps是一种细小杆菌,在显微镜下呈多形态,非溶血性,不运动,无芽孢,无鞭毛，革兰氏阴性。新分离的菌株多呈球杆状或双球状,有时可呈短链状,在陈旧培养物中多呈多形态,有长杆状和丝状。Hps培养条件严格，生长依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子),不需要X因子。目前认为胰蛋白胨大豆琼脂(TSA培养基)和胰蛋白胨大豆(TSB)培养基是最适培养基。在添加了NAD和血清的TSA培养基上生长的菌落呈圆形,隆起,表面光滑,边缘整齐，灰白色半透明，针尖大小。

副猪嗜血杆菌至少有15种血清型,但临床分离菌中约20％无法定型。不同血清型的毒力不同，其中血清1、5、10、12、13、14型毒力最强,2、4、8、112型具有中等毒力,3、6、7、9、11型不能引起临床感染。从世界范围内看,血清4、5、12、13型最为流行,日本、德国、美国、西班牙、加拿大和中国以血清4型和12型最常见,澳大利亚和丹麦分离的菌株主要为血清12型和13型,但最新的研究结果表明,危害北美各猪场的Hps流行血清型发生了改变,在美国的猪场中血清型5不再广泛流行,而以血清4型(39％)和不能分型的分离株(27％)最为流行。HPS在我国普遍流行，目前，在河北、河南、湖北、安徽、上海、广东、江西、江苏等省市均有HPS病的发生报道。我国当前Hps流行的优势血清型主要为4、5、12、13型。

目前以副猪嗜血杆菌病为代表的细菌病对养猪业的危害正日益加重，从而导致大量使用抗生素进行治疗，结果导致细菌耐药性不断增强，耐药菌株不断出现，尤其是副猪嗜血杆菌，非常容易耐药，导致治疗效果不好，从而养殖户加大抗生素用量，造成恶性循环。研究表明，用同血清型的菌株制成的灭活疫苗能够有效抵抗野毒株的感染，是预防和控制副猪嗜血杆菌病最有效的措施。近年来，国内也开展了灭活疫苗的研究，显示了很好的防治效果。因此，在了解本我国主要流行菌的血清型的基础上，采用灭活疫苗进行接种，可以有效预防本病的发生。同一血清型的Hps毒力可能不同，免疫原性也不同，所以，筛选一株毒力强、免疫原性好的菌株是制备Hps灭活疫苗的关键，也是预防控制本病的重中之重。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种血清12型副猪嗜血杆菌疫苗株(SHCM10)，该菌株是一株强毒株，具有很好的免疫原性，利用该菌株可以制备出效果良好的副猪嗜血杆菌灭活疫苗。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种血清12型副猪嗜血杆菌疫苗株，其分类命名为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)，菌株名称为SHCM10，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2014261，保藏日期：2014年6月15日。

该菌株由2010年5月在上海市崇明区一猪场发病猪分离获得的，具有较强的毒力和很好的免疫原性。经琼脂凝胶扩散试验证明，该菌株为血清12型。

利用该菌株通过常规方法制成不同佐剂的灭活疫苗，佐剂可以是白油佐剂、铝胶佐剂或206佐剂中的一种，分别得到的白油佐剂灭活疫苗含菌量为2.5×109CFU/mL、铝胶佐剂灭活疫苗含菌量为2.0×109CFU/mL、206佐剂灭活疫苗含菌量为2.5×109CFU/mL，可预防由血清12型副猪嗜血杆菌引起的副猪嗜血杆菌病。从而表明，该菌株是一株具有很好免疫原性。

本发明还提供了一种副猪嗜血杆菌灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)菌种选择血清12型副猪嗜血杆菌分离株SHCM10，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M2014261，保藏日期：2014年6月15日；