[发明专利]一种血清 12 型副猪嗜血杆菌疫苗株及其应用

权利要求书

1.一种血清12型副猪嗜血杆菌疫苗株，其特征在于，其分类命名为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)，菌株名称为SHCM10，已保藏于位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2014261，保藏日期：2014年6月15日。

2.一种如权利要求1所述血清12型副猪嗜血杆菌疫苗株在制备副猪嗜血杆菌灭活疫苗中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌灭活疫苗为白油佐剂灭活疫苗、铝胶佐剂灭活疫苗或206佐剂灭活疫苗。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述白油佐剂灭活疫苗中含菌量为2.5×10⁹CFU/mL。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述铝胶佐剂灭活疫苗中含菌量为2.0×10⁹CFU/mL。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述206佐剂灭活疫苗中含菌量为2.5×10⁹CFU/mL。

7.一种副猪嗜血杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)菌种选择血清12型副猪嗜血杆菌分离株SHCM10，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M2014261，保藏日期：2014年6月15日；

(2)生产种子的制备，取冻干的SHCM10株，加无菌生理盐水溶解后，划线接种于TSA培养基上，37℃培养24h，挑取三个典型菌落，分别接种到3.0mLTSB液体培养基中，37℃振荡培养20～22h，收获培养物，进行纯粹性检验，合格后按1％比例接种到TSB液体培养基中，37℃振荡培养20～22h，收获培养物，进行纯粹性检验，检验合格后，作为生产种子，置4℃，保存不超过1日；

(3)疫苗菌液的制备，取新鲜制备的生产种子，按1％比例接种到含有TSB培养基的发酵罐中，37℃振荡培养20～22h，收获并取样，进行纯粹性检验，并测量菌液OD值，每批疫苗菌液应无杂菌生长，且活菌数达到2.0×10⁹CFU/mL；

(4)菌液的灭活，向检验合格的菌液中加入质量分数为10％的甲醛溶液，使甲醛最终的质量浓度百分比为0.2％，于37℃灭活18h，每3～4h摇动一次；

(5)灭活疫苗的制备，将灭活检验合格的菌液采用常规方法制备成白油佐剂灭活疫苗、铝胶佐剂灭活疫苗或206佐剂灭活疫苗。