[发明专利]食用油样品中游离甾醇组份分析方法及地沟油鉴别方法

权利要求书

1. 一种食用油样品中游离甾醇组份分析方法，其特征在于：将待测食用油样品中经过固相萃取处理，分离出其中的游离甾醇，再将游离甾醇进行硅烷化衍生后注入全二维气相色谱-飞行时间质谱进行检测，然后对食用油样品中的甾醇类化合物进行定性和定量分析。

2. 根据权利要求1所述的食用油样品中游离甾醇组份分析方法，其特征在于：所述全二维气相色谱-飞行时间质谱分析所用的分析条件为：进样口温度300～320°C，以氦气为载气，流速为0.7～1mL/min，分流比为15～20：1，调制器温度补偿为35～40°C；调制周期为3s，其中热吹时间为1.15s，冷吹时间为0.35s；传输线温度设在310～315°C；质谱扫描范围：从50m/z 到700m/z，溶剂延迟为500～700s，检测器电压为1650～1750V，离子源温度设在230～250°C。

3. 根据权利要求1或2所述的食用油样品中游离甾醇组份分析方法，其特征在于：所述的全二维气相色谱-飞行时间质谱分析中一维柱为DB-5ms（30m × 0.25mm I.D. × 0.25μm）或HP-5ms（30m × 0.25mm I.D. × 0.25μm），均由美国Agilent Technologies提供；二维柱为Rxi-17Sil MS（2.0m × 0.15mm I.D. × 0.15μm），由美国Restek公司提供，或DB-17ht（1.5m × 0.10mm I.D. × 0.15μm），由美国Agilent Technologies提供，一维炉温箱的升温程序为：初始温度180～190°C，保持1min，然后以10～15°C/min的速率升到250°C，保持1min，再以2～3°C/min的速率升到280°C，保持2min，最后以9～11°C/min的速率升到300°C，保持20min；二维炉温箱的温度比一维炉温箱高15°C，升温程序：初始温度195～205°C，保持1min，然后以10～15°C/min的速率升到265°C，保持1min，再以2～3°C/min的速率升到295°C，保持2min，最后以9～11°C/min的速率升到315°C，保持20min；质谱数据采集频率为100 谱图/s（spectra/s）；进样量为1～2μL。

4.根据权利要求1或2所述的食用油样品中游离甾醇组份分析方法，其特征在于：所述的定性分析方法为：根据获得的待测食用油样品的二维色谱图，将各甾醇类化合物的一维和二维保留时间及其对应的质谱图与其对应的甾醇标准品经硅烷化衍生后检测获得的保留时间和质谱图进行相应比对，并同时与NIST库中相应甾醇硅烷化衍生物的标准质谱图进行比对，进行定性分析，获得食用油中甾醇类化合物的定性结果，其中，对于不易得到标准品的甾醇化合物（24-亚甲基胆固醇、芸薹甾烷醇、△⁷-芸薹甾烯醇、△^5,23-豆甾二烯醇、谷甾烷醇、△⁵-燕麦甾烯醇、△^5,24-豆甾二烯醇、△⁷-豆甾烯醇、△⁷-燕麦甾烯醇），将其相对保留时间与ISO 12228: 1999标准中报道的相对保留时间进行比对，同时将其质谱图与NIST谱库中相应甾醇硅烷化衍生物的标准质谱图进行比对，获得定性结果，所述的相对保留时间为各甾醇化合物一维保留时间/胆固醇三甲基硅醚一维保留时间的比值；

所述的定量分析方法为：建立各甾醇类化合物标准物内标曲线，具体为：精确称取不同质量的各甾醇类化合物标准物于不同的反应瓶中，并在每个反应瓶中加入胆甾烷醇内标，再加入硅烷化试剂，得到一系列不同浓度的各甾醇标准物体系，然后分别经硅烷化衍生反应后冷却至室温，进样到全二维气相色谱-飞行时间质谱进行分析，以各标准物的浓度为横坐标，各标准物在不同浓度时对应的峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，经过回归拟合得到各标准物的内标曲线，食用油样品中胆固醇、菜油甾醇、芸薹甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的含量采用各自对应标准品的内标曲线进行计算；对于食用油样品中没有相应的标准品的其它甾醇的定量分析使用豆甾醇内标曲线代替；

根据上述获得的食用油样品中游离甾醇的GC×GC-TOF/MS总离子流图，计算样品中各甾醇化合物的峰面积与内标峰面积的比值，利用相应的内标曲线，获得食用油中各甾醇化合物的含量。